Question

【題目】下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

(1)若圖2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，現在要培養乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，研究者需將該基因通過 （方法）注入到羊的 中，則發育成的羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。這一過程涉及到以下哪些過程（多選） 。

A．DNA自我復制B．DNA以其一條鏈為模板合成RNA

C．RNA自我復制D．按照RNA上密碼子的排列順序合成蛋白質

(2)若圖2中目的基因D需要同時使用MetⅠ和PstⅠ才能獲得，而圖1所示的質粒無相應的限制酶酶切位點。所以在該質粒和目的基因構建重組質粒時，需要對質粒改造，構建新的限制酶酶切位點。試幫助完成構建需要的限制酶酶切位點的思路（選填①-⑤）：

①EcoRⅠ②MetⅠ③PstⅠ④DNA連接酶⑤DNA聚合酶

首先用 處理質粒；然后用 處理質粒，使被切開的質粒末端連接上相應的脫氧核苷酸；再用 處理質粒，形成了的限制酶酶切割位點，它可被②識別。

(3)檢測篩選是一個重要步驟。圖3表示在一系列培養皿的相同位置上能出現相同菌落的一種接種方法與培養方法，以檢測基因表達載體是否導入大腸桿菌。培養基除了含有細菌生長繁殖必需的成分外，培養基A和培養基B分別還含有 、 。從篩選結果分析，含目的基因的是 （填編號）菌落中的細菌。

⑷DNA分子中，一條鏈的兩個核苷酸通過 連接。如要檢測目的基因是否成功表達，須提取培養后大腸桿菌解的 ，用相應抗體檢測。

Answer 1

【答案】（1）顯微注射 受精卵 ABD

（2）①⑤④②

（3）四環素 青霉素 4、6

（4）磷酸二酯鍵 總蛋白

【解析】（1）基因工程中，一般采取顯微注射法將含有目的基因的重組質粒導入受精卵細胞中，然后將該受精卵發育成具有目的基因的個體。在受精卵發育成個體的過程中涉及到細胞分裂和細胞分化，會發生DNA的復制、轉錄形成RNA，翻譯成蛋白質，但是不會發生RNA的復制，故選ABD。

（2）根據題干信息和圖像分析，對質粒改造，構建新的限制酶酶切位點時，首先用①EcoRⅠ處理質粒；然后用⑤DNA聚合酶處理質粒，使被切開的質粒末端連接上相應的脫氧核苷酸；再用④DNA連接酶處理質粒，形成了的限制酶酶切割位點，它可被②MetⅠ識別。

（3）培養基除了含有細菌生長繁殖必需的成分外，培養基A和培養基B分別還含有四環素和青霉素。從圖3篩選結果分析，培養基B中少了4、6菌落，所以含目的基因的是4、6菌落中的細菌。

（4）DNA分子中，一條鏈的兩個核苷酸之間是通過磷酸二酯鍵連接的。如要檢測目的基因是否成功表達，須提取培養后大腸桿菌解的總蛋白，用相應抗體檢測。