Question

【題目】a-干擾素是由人的白細胞產生的一種蛋白質，是抗病毒的一類特效藥，人類利用基因工程技術已經大批量生產干擾素�；卮鹣铝袉栴}:

(1)利用逆轉錄的方法合成a-干擾素基因時，所用的mRNA應從白細胞中提取，原因是_______這種方法合成的基因要比細胞內-干擾素基因短的原因是___________。

(2)在體外可利用PCR技術擴增a-干擾素基因，擴增過程是:目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，___________與單鏈相應互補序列結合，然后在DNA聚合酶作用下進行延伸，如此循環多次。該過程中，反應體系將溫度調控到70-75℃時，反應體系內進行的反應是_____。

(3)將擴増的-干抗素基因與運載體拼接成重組DNA需要用到的工具酶是____________.將重組DNA導入大腸桿菌內需用到鈣離子，原因是_____________________。

Answer 1

【答案】白細胞中有轉錄干擾素的mRNA 逆轉錄法合成的基因由于沒有啟動子、終止子、內含子等結構 引物 DNA聚合酶以目的基因為模板，將4種脫氧核糖核苷酸逐個按照堿基互補配對原則連接在引物之后，使合成的新鏈延伸，形成互補的DNA雙鏈 限制性酶和DNA連接酶 用處理大腸桿菌，使其成為感受態細胞，使細胞處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態

【解析】

PCR技術的流程：在高溫下（如95℃），作為模板的雙鏈DNA解旋成單鏈DNA；反應體系溫度降低時（如55℃），引物與模板的單鏈DNA的特定互補部位相配對和結合；反應體系溫度回升時（如72℃），DNA聚合酶以目的基因為模板，將4種脫氧核糖核苷酸逐個按照堿基互補配對原則連接在引物之后，使合成的新鏈延伸，形成互補的DNA雙鏈。如此進行多個循環，可以有選擇地大量擴增需要的DNA片段。

（1）α干擾素是由人的白細胞產生的一種蛋白質，白細胞中有轉錄干擾素的mRNA，再通過逆轉錄，轉錄出干擾素基因，用逆轉錄法合成的基因由于沒有啟動子、終止子、內含子等結構，故逆轉錄法合成的基因要比細胞內-α干擾素基因短。

（2）PCR技術的基本過程是：在高溫下，目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈；溫度降低，引物與單鏈相應互補序列結合；反應體系溫度回升到70-75℃時，DNA聚合酶以目的基因為模板，將4種脫氧核糖核苷酸逐個按照堿基互補配對原則連接在引物之后，使合成的新鏈延伸，形成互補的DNA雙鏈。

（3）將擴増的-干抗素基因與運載體拼接成重組DNA需要用到的工具酶是限制性酶和DNA連接酶。將目的基因導入微生物細胞常用感受態轉化法，即用處理大腸桿菌，使其成為感受態細胞，使細胞處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態。