Question

【題目】苯酚及其衍生物廣泛存在于工業廢水中，對環境有嚴重危害．某學校科研興趣小組準備依據如圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選出苯酚高效降解菌株．回答下列問題：

（1）甲圖中苯酚降解菌的富集培養基應含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有_____．

（2）將采集到的樣品接種培養，苯酚用量應隨轉接次數增加而逐漸_____．以達到獲得苯酚高效降解菌的目的．應采用______方法來進行該菌種的計數與分離，統計的菌落數往往比活菌的實際數目要_____．

（3）制備平板培養基時除了需要水、碳源、氮源、無機鹽和特殊營養物質外，還必須添加_____．培養基的滅菌方法為_____．

（4）乙圖為連續劃線法示意圖，在該圖中_____（填序號）區域最易獲得單菌落．如需要長期保存該菌種，應采用甘油管藏的方法，保存溫度為_____．

Answer 1

【答案】 蛋白胨 苯酚 增加（升高） 稀釋涂布平板 低 瓊脂（凝固劑） 高壓蒸汽滅菌 ③﹣20℃

【解析】試題分析：微生物培養基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。對異養微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養要素成分時并不是起單一方面的作用。微生物常見的接種的方法有：①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種、劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落；②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

（1）培養基成分中的有機物均可以提供碳源，即蛋白胨、苯酚據可以作為碳源。

（2）分析實驗可知，實驗目的是篩選苯酚降解菌，因此將采集到的樣品接種培養，苯酚用量應隨轉接次數增加而逐漸增加，以達到富集苯酚降解菌的目的。圖甲中采用的是稀釋涂布平板法，以便于菌落計數與分離，用這種方法統計的菌落數往往比活菌的實際數目要小，因為常常有兩個或多個菌體連在一起生長繁殖而形成一個菌落。

（3）制備平板培養基是固體培養基，除了需要水、碳源、氮源、無機鹽和特殊營養物質外，還必須添加瓊脂作為凝固劑。培養基的滅菌方法為高壓蒸汽滅菌法。

（4）圖2為平板劃線法，隨著劃線次數的增加，菌種進一步被稀釋，因此圖中③區域更易獲得單菌落。長期保存該菌種，應采用甘油管藏的方法，保存溫度為-20℃。