Question

【題目】為探究SHH基因與角化囊腫發生的相關性，科研人員利用SHH基因的非模板鏈轉錄合成的RNA作為探針，進行分子雜交實驗，以檢測SHH基因在角化囊腫中的表達情況。制作RNA探針的基本流程如圖所示：

請回答：

（1）步驟①中，需要使用的工具酶有 。

（2）步驟②中，用 處理大腸桿菌，使之成為________細胞，然后導入重組載體。

（3）步驟③中，用添加 的培養基培養大腸桿菌，挑選________（選填“藍色”或“白色”）菌落中的大腸桿菌為重組菌。

（4）重組載體中SHH基因轉錄合成RNA探針時，________（選填“需要”或“不需要”）啟動子。將制備的探針加入角化囊腫切片中，探針將與____________________形成雜交帶，進而判斷SHH基因的 情況。

Answer 1

【答案】

（1）限制酶 DNA連接酶

（2）氯化鈣溶液（或鈣離子） 感受態

（3）氨芐青霉素 白色

（4）需要 SHH轉錄形成的mRNA 轉錄

【解析】

（1）步驟1是構建基因表達載體需要用限制酶和DNA連接酶。

（2）將外源基因導入微生物細胞中需要用氯化鈣溶液處理大腸桿菌，使之成為容易接受外源DNA的感受態細胞。

（3）由圖分析可知該表達載體上的標記基因是氨芐青霉素抗性，所以應用添加氨芐青霉素的培養基培養大腸桿菌，挑選白色的菌落，因為目的基因插入后破壞了LacZ基因。

（4）轉錄需要啟動子，RNA聚合酶結合到啟動子上啟動轉錄，探針會與SHH基因轉錄形成的mRNA形成雜交帶，有雜交帶的出現，說明SHH基因轉錄成功。

生物種類	植物	動物	微生物
常用方法	農桿菌轉化法	顯微注射技術	感受態細胞法
受體細胞	體細胞或受精卵	受精卵	原核細胞
轉化過程	將目的基因插入到Ti質粒的TDNA上→農桿菌→導入植物細胞→整合到受體細胞染色體的DNA上→表達	將含有目的基因的表達載體提純→取卵（受精卵）→顯微注射→受精卵發育→獲得具有新性狀的動物	Ca2＋處理細胞→感受態細胞→重組表達載體DNA分子與感受態細胞混合→感受態細胞吸收DNA分子