Question

【題目】科學(xué)家按下圖所示過程利用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)口蹄疫疫苗（主要成分是口蹄疫病毒的一種蛋白質(zhì)VPI），請回答下列問題。

（1）口蹄疫病毒的遺傳物質(zhì)為RNA，過程①必須用到的酶是 ，過程②必須用到的酶是 。

（2）重組質(zhì)粒含有VPI基因及其啟動子、終止子等，其中終止子的作用是 。過程②將VPI基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的 中。過程⑥的培養(yǎng)基中需要添加 以篩選出含有重組質(zhì)粒的葉片小段。

（3）獲得表達VPI蛋白的番茄植株以后，需要進行免疫效力的測定。具體方法是：將轉(zhuǎn)基因番茄葉片提取液注射到豚鼠體內(nèi)，每半個月注射一次，三次后檢測豚鼠血液內(nèi)產(chǎn)生的 的數(shù)量。

（4）下圖箭頭表示外源DNA上相關(guān)限制酶的酶切位點，據(jù)圖分析，最好用 酶處理外源DNA以獲得目的基因，其優(yōu)點在于可以防止 。

Answer 1

【答案】（1）逆轉(zhuǎn)錄酶 限制酶和DNA連接酶

（2）使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來 T—DNA 卡那霉素

（3）VPI抗體

（4）BamHI和Hind Ⅲ 含目的基因的外源DNA片斷自身環(huán)化

【解析】

試題分析：圖示表示利用轉(zhuǎn)基因番茄來生產(chǎn)口蹄疫疫苗，而口蹄疫病毒的遺傳物質(zhì)為RNA，因此要獲得目的基因必須使用逆轉(zhuǎn)錄的方法獲得。①表示目的基因的獲取、②表示目的基因與運載體重組、③表示目的基因?qū)�入農(nóng)桿菌、④表示利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、⑤⑥⑦表示利用植物的組織培養(yǎng)技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因植株。

（1）用逆轉(zhuǎn)錄的方法獲取目的基因，需要要用到逆轉(zhuǎn)錄酶；構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程中，需要用到的工具有限制酶和DNA連接酶。

（2）重組質(zhì)粒中終止子的作用是終止目的基因的轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來。為了使目的基因能轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞的DNA上，目的基因應(yīng)插入到Ti質(zhì)粒的T—DNA片段中。為了篩選出導(dǎo)入目的基因的細(xì)胞，需要在培養(yǎng)受體細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入卡那霉素。

（3）獲得表達VPI蛋白的番茄植株以后，測定免疫效力的方法是：多次注射轉(zhuǎn)基因番茄葉片提取液注射到豚鼠體內(nèi)，檢測豚鼠血液內(nèi)產(chǎn)生的VPI抗體的數(shù)量。

（4）由圖2可知，標(biāo)記基因和外源DNA目的基因中均含有SmaⅠ酶切位點，都可以被SmaⅠ破壞，故不能使用該酶剪切含有目的基因的DNA，只使用EcoR I，則質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端相同，用連接酶連接時，會產(chǎn)生質(zhì)粒和目的基因自身連接物，而利用BamHⅠ和Hind Ⅲ剪切時，質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端不同，用DNA連接酶連接時，不會產(chǎn)生自身連接產(chǎn)物。