Question

【題目】科學家按如圖1所示過程利用轉基因番茄生產口蹄疫疫苗（主要成分是口蹄疫病毒的一種蛋白質VPI），請回答下列問題．

（1）口蹄疫病毒的遺傳物質為RNA，過程①必須用到的酶是 ， 過程②必須用到的酶是 ．
（2）重組質粒含有VPI基因及其啟動子、終止子等，其中終止子的作用是 ． 過程②將VPI基因插入農桿菌Ti質粒的中．過程⑥的培養基中需要添加以篩選出含有重組質粒的葉片小段．
（3）獲得表達VPI蛋白的番茄植株以后，需要進行免疫效力的測定．具體方法是：將轉基因番茄葉片提取液注射到豚鼠體內，每半個月注射一次，三次后檢測豚鼠血液內產生的的數量．
（4）如圖2箭頭表示外源DNA上相關限制酶的酶切位點，據圖分析，最好用酶處理外源DNA以獲得目的基因，其優點在于可以防止 ．

Answer 1

【答案】
（1）逆轉錄酶；限制酶和DNA連接酶
（2）使轉錄在所需要的地方停止下來；T﹣DNA；卡那霉素
（3）VPI抗體
（4）BamHI和HindII；含目的基因的外源DNA片斷自身環化
【解析】解：（1）①是以RNA為模板合成DNA的逆轉錄過程．②是基因表達載體的構建過程，該過程首先要用限制酶切割外源DNA分子和運載體，其次要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA分子．（2）重組質粒含有VPI基因及其啟動子、終止子等，其中終止子的作用是使轉錄在所需要的地方停止下來．農桿菌中的Ti質粒上的T﹣DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據農桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質粒的T﹣DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．由圖可知，重組質粒上含有卡那霉素抗性基因，可用于篩選出含有重組質粒的葉片小段，所以培養基中除了加入各種必需營養物質和生長素和細胞分裂素等激素外，還需要添加卡那霉素．（3）體液免疫中，抗原進入機體，首先被巨噬細胞進行處理并呈遞給T細胞，再呈遞給B細胞，被激活B細胞將大量增殖并分化為漿細胞和記憶細胞，漿細胞產生抗體，與抗原特異性結合．（4）在目的基因上，存在Sma I、EcoR I、HindⅢ和BamH I四種酶的酶切位點，但是Sma I酶的切割位點在目的基因中間序列，用該酶切割不能獲得完整的基因．使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA，與只使用EcoRⅠ同時處理質粒、外源DNA相比較，前者可以防止質粒和含目的基因的外源DNA片段自身環化，因此
最好用BamHI和HindII酶處理外源DNA以獲得目的基因．
【考點精析】掌握基因工程的原理及技術是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術．