Question

【題目】下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖l、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。

（1）一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)Sma Ⅰ切割后，含有_________個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_____________________。

（2）與只使用EcoR I相比較，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于________________________________________________。

（3）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在_______________的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測。

（4）下列有關(guān)限制酶的敘述正確的是__________________。

A．從反應(yīng)類型來看，限制酶催化的是一種水解反應(yīng)

B．限制酶的活性受溫度、pH的影響

C．一種限制酶只能識(shí)別雙鏈DNA中某種特定的脫氧核苷酸序列

D．限制酶識(shí)別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的幾率就越小

若用限制酶A、B單獨(dú)或聯(lián)合切割一個(gè)5000bp（bp為堿基對(duì)）大小的線狀DNA分子，相關(guān)實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)如下表。

	第一步水解	產(chǎn)物（bp）	第二步水解	產(chǎn)物（bp）
實(shí)驗(yàn)1	A酶切割	2100	將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用B酶切割	200、1900
		1400		600、800
		1000		1000
		500		500
實(shí)驗(yàn)2	B酶切割	2500	將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用A酶切割	1900、600
		1300		800、500
		1200		1000、200
實(shí)驗(yàn)3	A酶、B酶同時(shí)切割	1900、1000、800、600、500、200

（5）由單酶剪切的片段數(shù)可知，A酶和B酶的酶切位點(diǎn)分別為_______個(gè)和_______個(gè)。

（6）綜合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析，在下圖中繪制出實(shí)驗(yàn)3的酶切圖譜。

_______________

（每小格代表100bp）

Answer 1

【答案】2 SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 可以防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化 蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì) ABC 3 2

【解析】

（1）由于質(zhì)粒在切割前是一個(gè)環(huán)狀DNA分子，當(dāng)質(zhì)粒被切割后形成了兩個(gè)末端各有1個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，故共有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。質(zhì)粒抗生素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，由圖可知，標(biāo)記基因和外源DNA目的基因中均含有SmaI酶切位點(diǎn)，都可以被SmaI酶破環(huán)，故不能使用該酶剪切質(zhì)粒和含有目的基因的DNA。

（2）構(gòu)建含目的基因的重組質(zhì)粒A時(shí)，選用 BamhHI 和HindⅢ酶對(duì)外源DNA和質(zhì)粒進(jìn)行切割，這樣使目的基因兩端的黏性末端不同，可以防止含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，同理，也可以防止質(zhì)粒自身環(huán)化。

（3）喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌不能在以蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中生長，而導(dǎo)入重組質(zhì)粒的喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，能在以蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所以可以將受體細(xì)胞用以蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基培養(yǎng)，完成目的基因表達(dá)的初步檢測。

（4）A、限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，即催化的是一種水解反應(yīng)，A正確；

B、限制性內(nèi)切酶的活性受溫度、pH的影響，在最適宜的溫度和pH條件下，酶的活性最高；溫度和pH偏高或偏低，酶的活性都會(huì)明顯降低；在過酸、過堿或溫度過高條件下酶會(huì)變性失活，而在低溫條件下酶的活性降低，但不會(huì)失活，B正確；

C、一種限制性內(nèi)切酶只能識(shí)別雙鏈DNA中某種特定的脫氧核苷酸序列，并在特定的位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵，說明酶專一性，C正確；

D、限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的幾率就越大，D錯(cuò)誤。

故選ABC。

（5）分析表格中的數(shù)據(jù)可知，單獨(dú)用A酶切割可以產(chǎn)生4個(gè)DNA片段，所以A酶的酶切位點(diǎn)有3個(gè)；單獨(dú)用B酶切割可以產(chǎn)生3個(gè)DNA片段，所以B酶的酶切位點(diǎn)有2個(gè)，該線性DNA分子上含有3個(gè)A酶切割位點(diǎn)，含有2個(gè)B酶切割位點(diǎn)。

（6）經(jīng)A酶切割后獲得的2100bp片段，再用B酶切割后又產(chǎn)生200bp和1900bp兩個(gè)片段，則B酶的切割位點(diǎn)如圖1；經(jīng)B酶切割后獲得的2500bp片段，再用A酶切割后又產(chǎn)生1900bp和600bp兩個(gè)片段，則A酶的切割位點(diǎn)如圖2

根據(jù)表中數(shù)據(jù)結(jié)合以上分析可知，A酶和B酶的切割位點(diǎn)如下：