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40．【生物—選修3：現代生物科技專題】（15分）

       使用DNA重組技術，把天然或人工合成的遺傳物質定向插入細菌、酵母菌或哺乳動物細胞中，使之充分表達，經純化后而制得的疫苗稱為基因工程疫苗。已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面A蛋白為主要抗原，其基因工程疫苗生產流程如圖30。請回答：

       （1）過程①表示             。

（2）可能利用               技術擴增獲得A基因。使用該技術的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列來合成           。還需要有耐熱的         酶。擴增時DNA解鏈的溫度應控制在        ℃。而互補鏈延伸時的溫度應控制在           ℃。

（3）過程③構建A基因重組載體時，除了A基因外，還必須有      、     和      基因等。這一過程需要使用            和               這兩種工具酶。

（4）過程④中選用大腸桿菌作為受體細胞，最常見的轉化方法是：用              處理，得到          細胞，再將經過處理的細胞與溶有A基因重組表達載體的緩沖溶液混合，并控制在一定的溫度使之完成轉化。

（5）可用             技術檢測受體細胞菌的DNA上是否插入了A基因，要檢測A基因是否成功表達還需檢測受體細菌                   。

（選修三）2008年諾貝爾化學獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面作出突出貢獻的科學家。綠色熒光蛋白能在藍光或紫外光的激發下發出熒光，這樣借助GFP發出的熒光就可以跟蹤蛋白質在細胞內部的移動情況，幫助推斷蛋白質的功能。GFP基因可作為目的基因用于培育綠色熒光小鼠，圖中表示培育綠色熒光小鼠的基本流程：

請根據上述材料回答下列問題。

（1）培育綠色熒光小鼠的過程用到了哪些現代生物技術？

（2）用于培育綠色熒光小鼠的基因表達載體的組成必須有啟動子、終止子和　　　。圖中過程②常用的方法是　　　　；在進行過程④前，利用　　　　技術可以獲得數目更多且基因型相同的綠色熒光小鼠。

（3）GFP基因與目的基因一起構建到載體上不影響目的基因表達，也不影響由目的基因控制合成的蛋白質的結構與功能，且對細胞無毒性作用，因此GFP基因可以作為基因表達載體上的　　　　　。

（4）目前科學家通過　　　　工程制造出了藍色熒光蛋白、黃色熒光蛋白等，該工程是直接改造GFP分子還是改造GFP基因？　　　　。請寫出該工程的基本流程：