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回答基因工程的有關問題：(共9分)
（1）構建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產生黏性末端，也可能產生_____末端。若要在限制酶切割目的基因和質粒后使其直接進行連接，則應選擇能使二者產生_____（相同，不同）黏性末端的限制酶。
（2）利用大腸桿菌生產人胰島素時，構建的表達載體含有人胰島素基因等，其中RNA聚合酶識別和結合的部位是_____。在用表達載體轉化大腸桿菌時，常用_____處理大腸桿菌，以利于表達載體進入。為了檢測胰島素基因是否轉錄出了mRNA，可用放射性同位素標記的______ 作探針與mRNA雜交，該雜交技術稱為______。為了檢測胰島素基因轉錄的mRNA是否翻譯成胰島素，常用______          技術。
(3)如果要將某目的基因通過農桿菌轉化法導入植物細胞，先要將目的基因插入農桿菌Ti質粒的_____中，然后用該農桿菌感染植物細胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細胞的______上。

用來治療糖尿病的胰島素，過去主要靠從動物體器官、組織中提取，但因受原料限制，無法推廣。現在，可以用發酵工程的方法來生產胰島素。若用大腸桿菌發酵來生產胰島素，并結合基因工程，寫出其生產過程：

(1)構建轉入人胰島素基因的工程菌。

①提取目的基因：用胰島素基因探針從人的胰島細胞中獲取             ，再用      法制備人的胰島細胞目的基因。

②目的基因與運載體結合：從大腸桿菌的細胞中提取       ，并用      酶切割質粒，使其露出               。用同一種酶切割目的基因使其產生相同的               ，再將目的基因插人質粒切口處，加入適量的               酶，這樣就形成了一個               和               的重組DNA。

③將目的基因導人受體細胞：將大腸桿菌用          處理，以增大               的通透性，讓重組DNA進人大腸桿菌體內。

④目的基因的檢測和表達：在用一定的方法檢測出目的基因已導人大腸桿菌細胞內，并            后，再對該種大腸桿菌擴大培養。

(2)發酵生產。如圖為發酵罐，回答：（括號中填數字,如[1]）

①配制適合大腸桿菌的培養基，調整        ，然后對培養基進行             處理并裝入發酵罐，將上述大腸桿菌接種于發酵罐發酵

②若經檢測若發現放料口排出的舊培養基中微生物細胞形態多樣，甚至出現畸形，則此時微生物的生長處于     期，加料口[   ]添加新培養基的速度應該適當     ，并從[   ]以適當速度通入     

③若該裝置階段發酵的目的是為擴大培養生產酵母菌菌種，則應盡可能延長         期，采取的主要措施為：加料口放料的速度都           ，通人的無菌空氣成分中應           ，攪拌的速度適當             

④影響發酵過程中溫度變化的因素是                

⑤發酵過程中pH變化的原因是                     

⑥攪拌器攪拌的作用是                          

(3)發酵完畢后，從培養基中            并             胰島素，經過一定的加工成為藥用胰島素，經           合格后，可投入使用。

回答有關基因工程的問題：（9分）
（1） 構建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產生粘性末端，也可能產生   _   末端。若要在限制酶切割目的基因和質粒后使其直接進行連接，則應選擇能使二者產生_____（相同，不同）粘性末端的限制酶。
（2）利用大腸桿菌生產人胰島素時，構建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是                                                    。在用表達載體轉化大腸桿菌時，常用   處理大腸桿菌，以利于表達載體進入：為了檢測胰島素基因是否轉錄出了mRNA，可用標記的          片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術稱為                 。為了檢測胰島素基因轉錄的mRNA是否翻譯成                _，常用抗原-抗體雜交技術。
（3）如果要將某目的基因通過農桿菌轉化法導入植物細胞，先要將目的基因插入農桿菌Ti質粒的       _    中，然后用該農桿菌感染植物細胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細胞的       _上。

以重組DNA技術為核心的基因工程正在改變著人類的生活。請回答下列問題。
(1)獲得目的基因的方法通常包括    和   。
(2)切割和連接DNA分子所使用的酶分別是         。
(3)運送目的基因進入受體細胞的載體一般選用病毒或     ，后者的形狀呈     。
(4)由于重組DNA分子成功導入受體細胞的頻率 ，所以在轉化后通常需要進行   操作。
(5)將人胰島素基因分別導入大腸桿菌與酵母菌，從兩者中生產的胰島素在功能和  序列上是相同的。

基因工程自20世紀70年代興起后，發展迅猛，成果顯著。
Ⅰ利用大腸桿菌生產人胰島素時，構建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是       ______。在用表達載體轉化大腸桿菌時，常用            處理大腸桿菌，以利于表達載體進入；為了檢測胰島素基因是否轉錄出了mRNA，可用標記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術稱為       __________   。為了檢測胰島素基因轉錄的mRNA是否翻譯成蛋白質，常用______________________技術。
Ⅱ近10年來，PCR技術（多聚酶鏈式反應）成為分子生物學實驗室的一種常規手段，下圖為PCR原理示意圖，據圖回答問題。

（1）基因工程中，利用PCR技術來________________，PCR技術依據的原理是DNA的半保留復制，生物體內也能完成DNA的復制，但有所不同，圖中A過程稱為____________，在生物體內需要____________才能完成。圖中B 過程的完成需要_________等條件（3分）。
（2）若DNA樣品的長度為100個堿基對，且A占15%，則完成三次循環，共需要提供的胞嘧啶脫氧核苷酸___________個。