Question

【題目】牛奶是微生物生長的良好培養基。牛奶在飲用前都要經過巴氏消毒，以殺死有害微生物。為檢測自制酸奶是否被雜菌污染，進行如圖所示操作。請回答下列問題。

（1）牛奶用巴氏消毒的好處是_________。

（2）圖中所用培養基在滅菌過程中，需用到高壓蒸汽滅菌鍋。下面是關于高壓蒸汽滅菌鍋使用過程中的操作，正確的先后順序是①②_________⑨。(有的操作可以重復)

①裝入待滅菌物品 ②加蓋 ③加熱滅菌鍋④打開排氣閥 ⑤關閉排氣閥 ⑥切斷電源⑦壓力表的壓力降到零 ⑧打開蓋子 ⑨取出滅菌物品

（3）取最終的牛奶稀釋液0.1mL滴在培養基上進行涂布，應選擇的工具是下圖中_________。

（4）圖中所示方法為稀釋涂布培養法，理想情況下，培養一段時間后可在培養基表面形成菌落。若用該方法培養設置了3個培養皿，菌落數分別為65個、63個、64個，則可以推測酸奶中每毫升含細菌數為_________個，運用這種方法統計的結果往往較實際值_________ (偏大/偏小)，如果培養基上出現_________的菌落，說明自制酸奶已被雜菌污染。

（5）已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，要進一步分離純化乳酸菌采用下圖所示的劃線分離操作，正確的是_________，其正確操作過程中，培養基在劃線時劃線工具至少要灼燒_________次。

Answer 1

【答案】牛奶的營養成分不被破壞（營養成分沒有損失） ③④⑤⑥⑦④⑧ B 6.4×108 偏小 （形狀、大小、顏色、光澤度）不同 B 5

【解析】

滅菌是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所用的微生物（包括芽孢和孢子），常用的方法主要有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌，適用對象主要有接種環、接種針、玻璃器皿、培養基等。消毒是指使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分微生物（不包芽孢和孢子），常用的方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學藥劑消毒法、紫外線消毒法，適用對象主要有操作空間、某些液體、雙手等，稀釋涂布平板法常用來進行微生物的計數。

（1）常用的消毒方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學藥劑消毒法、紫外線消毒法。巴氏消毒的方法是指70-75℃煮30分鐘或80℃煮15分鐘，使用這種方法對生鮮牛奶進行消毒的好處是牛奶的營養成分不被破壞。

（2）a.首先將內層滅菌桶取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜；b.放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品；c.加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內；d.用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣；e.滅菌所需時間到后，切斷電源或關閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品．如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而發生污染；f.將取出的滅菌培養基放入37℃溫箱培養24小時，經檢查若無雜菌生長，即可待用。故高壓蒸汽鍋滅菌的操作步驟：①裝入待滅菌物品，②加蓋，③加熱滅菌鍋，④打開排氣閥，⑤關閉排氣閥，⑥切斷電源，⑦壓力表的壓力降到零，④打開排氣閥，⑧打開蓋子，⑨取出滅菌物品。

（3）將液體菌種滴在培養基上進行涂布的方法是稀釋涂布平板法，所用的接種工具是涂布器，即圖中的B。

（4）由于圖中稀釋了106倍，牛奶中每毫升含細菌數為（65+63+64）÷3÷0.1×106=6.4×108個。由于經此方法接種培養時當兩個或多個菌落重疊在一起時按一個菌落計算，所以運用這種方法統計的結果往往較實際值偏小。如果培養基上出現（形狀、大小、顏色、光澤度）不同的菌落，說明自制酸奶已被雜菌污染。

（5）要進一步分離純化乳酸菌采用平板劃線法進行操作，圖中所示的平板劃線分離的操作正確的是B圖，接種環在每次接種前和接種結束后都要通過灼燒來滅菌，所以完成圖4次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結束后還需灼燒滅菌1次，以防止造成污染，因此完成圖B劃線共需灼燒接種環5次。