Question

【題目】植物基因工程中，往往用光誘導型啟動子(PrbcS)使目的基因表達，其結合T基因后能使目的基因更高水平表達。下圖中①和②都為基因表達載體構建過程中的中間載體，請分析重組載體的部分構建過程并回答下列問題：

注：Ampr/Kmr分別為氨芐青霉素/卡那霉素抗性基因。origin為復制原點，其余為限制酶酶切位點。

（1）對雙子葉植物進行基因工程改造最常用的方法是____________，還需結合__________技術才能獲得新性狀的植株。

（2）中間載體通常用______________法導入微生物中擴增，含有中間載體②PrbcS*T的微生物________（“能”或“不能”）在含有卡那霉素的培養基中生長，________（“能”或“不能”）在含有氨芐青霉素的培養基中生長。

（3）經酶切后凝膠電泳，測得2B片段為0.4kb，經圖示信息分析，Prbcs*T的長度約為____________________。據圖分析，中間載體②2B形成中間載體②PrbcS*T，需要使用限制酶_________________切割。

（4）在T基因前“點突變引入NcoⅠ”酶切位點的方法是：設計包含_________識別序列的引物，然后用PCR技術擴增。

Answer 1

【答案】農桿菌轉化法 植物組織培養 感受態細胞 能 不能 1.7 kb HindⅢ和EcoRⅠ NcoⅠ

【解析】

本題考查基因工程和植物細胞工程的相關知識，意在考查考生的識圖能力和理解所學知識要點，把握知識間內在聯系，形成知識網絡結構的能力；能運用所學知識，準確判斷問題的能力。

（1）將目的基因導入雙子葉植物常利用農桿菌轉化法；要想獲得轉基因植物，還需要對導入目的基因的受體細胞進行植物組織培養才能獲得新性狀的植株；

（2）將中間載體導入微生物時常先用鈣離子處理微生物使其成為感受態，易于吸收中間載體，該種方法為感受態細胞法；由圖可知，中間載體②上含卡那霉素抗性基因，而不含氨芐青霉素抗性基因，故含有中間載體②PrbcS*T的微生物能在含有卡那霉素的培養基中生長，而不能在含有氨芐青霉素的培養基中生長；

（3）由圖可知，中間載體②的長度為2.7kb，經酶切后凝膠電泳，測得2B片段為0.4kb，設Prbcs*T的長度為y，則2.7-0.4+y=4kb，解得y=1.7kb；根據圖示中中間載體①PrbcS*T右側的酶切位點和中間載體②-2B右側的酶切位點可知，中間載體②2B形成中間載體②PrbcS*T，需要使用限制酶HindⅢ和EcoRⅠ切割；

（4）可設計包含NcoⅠ識別序列的引物，然后用PCR技術擴增，即可在T基因前“點突變引入NcoⅠ”酶切位點。