Question

【題目】骨肉瘤是最常見的惡性成骨性腫瘤之一。科研人員研究曲古抑菌A（TSA）對人骨肉瘤細胞凋亡的影響及作用機制，為臨床治療尋找新方向。實驗過程如下：

步驟1 用含青霉素和鏈霉素的高糖培養基，在37℃、5% CO2培養箱中培養人骨肉瘤細胞一段時間。

步驟2 取適宜濃度的處于生長旺盛期的人類骨肉瘤細胞，用加入不同濃度的TSA（0～200

ng·mL-1）的培養基繼續培養24h。

步驟3 對各組細胞進行抽樣檢測，檢測方法是先用臺盼藍試劑（一種細胞活性染料）染色再用血細胞計數板計數，統計細胞存活率（未染色細胞數/細胞總數×100%），結果如圖1。

步驟4 分別提取TSA濃度為0 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1處理的3組細胞，測量細胞中與凋亡相關的基因（Bax、Bcl-2）和β-肌動蛋白基因（不同的組織細胞中表達相對恒定）表達的蛋白質量并計算比值，結果如圖2。

分析回答：

（1）與正常成骨細胞相比，骨肉瘤細胞容易在體內分散和轉移，其主要原因是 。高糖培養基中加入青霉素和鏈霉素的目的是 ，細胞培養箱中保持5% CO2的作用是 。

（2）步驟2中，設置0 ng·mL-1 TSA實驗的主要目的是 。

（3）用臺盼藍試劑檢測細胞活性的主要原理是 。

（4）圖1所示結果表明 。

（5）根據圖2判斷，骨肉瘤細胞中 基因過度表達會加速細胞凋亡。

Answer 1

【答案】（1）骨肉瘤細胞膜上的糖蛋白等物質減少 防止雜菌污染 維持培養液pH

（2）排除非測試因素對實驗結果的影響

（3）活細胞的細胞膜具有選擇透過性，臺盼藍不能進入活細胞內（死細胞膜失去選擇透過性，臺盼藍能進入死細胞內）

（4）TSA濃度越高對骨肉瘤細胞凋亡的促進作用越強

（5）Bax

【解析】

（1）骨肉瘤細胞屬于癌細胞，癌細胞細胞膜上的糖蛋白等物質減少，細胞容易在體內分散和轉移。高糖培養基中加入青霉素和鏈霉素的目的防止雜菌污染。細胞培養箱中保持5% CO2的作用是維持培養液pH。

（2）0 ng·mL-1 TSA實驗組為對照組，排除除試驗因素以為非測試因素對實驗結果的影響。

（3）活細胞的細胞膜具有選擇透過性，臺盼藍不能進入活細胞內，而死細胞膜失去選擇透過性，臺盼藍能進入死細胞內，這樣，活細胞不會染成顏色，而死細胞會出現藍色，從而可以統計出細胞死亡個數。

（4）TSA濃度越高，細胞存活率越低，細胞死亡數越多，說明TSA濃度越高對骨肉瘤細胞凋亡的促進作用越強。

（5）TSA濃度越高，培養液中的Bax蛋白更多， Bax蛋白由Bax基因表達，因此說明骨肉瘤細胞中Bax基因過度表達出Bax蛋白，會加速細胞凋亡。