Question

【題目】下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注．請(qǐng)回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

（1）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選__________兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒．為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于_____態(tài)的大腸桿菌．

（2）為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加___平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中___．

（3）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為 _______，對(duì)于該部位，這兩種酶 ______（填“都能”、“都不能”或“只有一種能”）切開．

（4）若用Sau3AI切圖1質(zhì)粒最多可能獲得______種大小不同的DNA片段．

Answer 1

【答案】BclⅠ和HindⅢ 感受 四環(huán)素 引物甲和引物丙 TGATCC或 GGATCA ACTAGG CCTAGT 都不能 7

【解析】

本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，旨在考查考生信息獲取的能力與知識(shí)的遷移運(yùn)用能力。

（1）選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在識(shí)別位點(diǎn)，但BamHⅠ會(huì)破壞標(biāo)記基因，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割；酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒，為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于感受態(tài)的大腸桿菌；
（2）由于構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，氨芐青霉素抗性基因被破壞，而四環(huán)素抗性基因沒有被破壞，故為篩選出轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素；PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結(jié)合，沿相反的方向合成子鏈，故所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙；
（3）根據(jù)BamHⅠ和BclI的酶切位點(diǎn)，若BamHI酶切的DNA末端與BclI酶切的DNA末端連接，則連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為，對(duì)于該部位，由于與兩種酶的酶切位點(diǎn)均不同，故這兩種酶都不能切開；

（4）根據(jù)BamHⅠ、BclI和Sau3AI的酶切位點(diǎn)，Sau3AI在質(zhì)粒上有三個(gè)酶切位點(diǎn)，完全酶切可得到記為A、B、C三種片段，若部分位點(diǎn)被切開，可得到AB、AC、BC、ABC四種片段，所以用Sau3AI切圖1質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。