Question

【題目】已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原，制備抗A蛋白抗體的部分流程如下圖。

請回答：

（1）①代表的是______________過程。為獲得A基因表達載體，需用__________酶對A基因和運載體進行切割。將A基因表達載體導入動物細胞常用的方法是___________________________。

（2）利用PCR技術擴增A基因時，設計引物序列的主要依據是___________，加入引物的作用是________。

（3）與體內DNA復制相比較，PCR反應要在一定的緩沖溶液中才能進行，并且要嚴格控制____________等條件。

（4）過程③采用的技術是________________。

Answer 1

【答案】 逆轉錄 限制酶 顯微注射 A基因兩端的部分核苷酸序列 與A基因單鏈相應互補序列結合，然后在DNA聚合酶作用下進行延伸 溫度 動物細胞融合

【解析】試題分析：分析題圖，圖示為疫苗生產和抗體制備的流程之一，其中①表示逆轉錄過程；②是獲取目的基因（A基因）的過程；③是細胞融合過程；X為雜交瘤細胞。

（1）由以上分可知①是逆轉錄過程。構建基因表達載體時，首先需要用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法。

（2）利用PCR技術擴增A基因時，根據A基因兩端的部分核苷酸序列設計引物序列，加入引物的作用是與A基因單鏈相應互補序列結合，然后再DNA聚合酶作用下進行延伸。

（3）PCR擴增目的基因的過程：①高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈．因此，與體內DNA復制相比較，PCR反應要在一定的緩沖溶液中才能進行，并且要嚴格控制溫度等條件。

（4）根據圖中信息可知X為雜交瘤細胞，則③過程需要采用動物細胞融合技術。