Question

【題目】中國苦蕎富含黃酮類化合物等營養物質，在降血糖、降血脂等方面功效顯著．查爾酮合成酶（CHS）是黃酮類化合物合成的關鍵酶，如圖為將修飾后的CHS基因導入苦蕎，培育高產黃酮苦蕎品系示意圖．

（1）要對培養基徹底滅菌應采用的滅菌方法是__．接種前，用滅菌后未接種的培養基培養一段時間，觀察是否形成菌落，目的是__．

（2）接種前，外植體用__和0.1%的氯化汞溶液進行消毒后都需經無菌水清洗．接種后2﹣5天，若發現外植體邊緣局部污染，原因可能是__．

（3）過程②叫做__，通過②和③過程能成功地把離體的苦蕎體細胞能培育成植株，此技術所利用的原理是__．

（4）判斷轉基因苦蕎培育是否成功，可比較轉基因苦蕎與普通苦蕎的黃酮類化合物含量，也可通過凝膠色譜法分離測定細胞中CHS含量，由于CHS__，所以最先從色譜柱中洗脫出來，工業化生產中，可利用__技術以提高CHS的利用率而節約成本．

Answer 1

【答案】 高壓蒸汽滅菌 判斷培養基滅菌是否徹底 70%的酒精 外植體消毒不徹底 脫分化 植物細胞的全能性 相對分子量大 固定化酶（固定化細胞）

【解析】基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取；②基因表達載體的構建；③將目的基因導入受體細胞；④目的基因的檢測與鑒定．其中構建基因表達載體是基因工程的核心步驟，需要限制酶和DNA連接酶。植物組織培養技術包括脫分化和再分化兩個重要過程，而決定植物脫分化和再分化的關鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細胞分裂素的協同作用在組織培養過程中非常重要。

（1）培養基徹底滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌法；為了判斷培養基滅菌是否徹底，接種前應該用滅菌后未接種的培養基培養一段時間，觀察是否形成菌落。

（2）外植體是植物組織培養的對象，應該用70%的酒精進行消毒；若接種后2-5天，發現外植體邊緣局部污染，原因可能是外植體消毒不徹底。

（3）圖中過程②表示脫分化形成愈傷組織的過程；③過程表示再分化，通過②和③過程將離體的苦蕎體細胞培育成完整植株的技術是植物組織培養技術，該技術的原理是植物細胞的全能性。

（4）通過凝膠色譜法分離測定細胞中CHS含量時，由于CHS相對分子量大，所以最先從色譜柱中洗脫出來；工業化生產中，可利用固定化酶（或固定化細胞）技術以提高CHS的利用率而節約成本。