Question

【題目】下圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線(xiàn)。圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、SmaI指示線(xiàn)所示為三種限制酶的酶切位點(diǎn)。

據(jù)圖回答：

（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用________限制酶，同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含____________的培養(yǎng)基上進(jìn)行。

（2）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是（______）（填字母代號(hào)）

A．啟動(dòng)子 B．tetR C．復(fù)制原點(diǎn) D．a(chǎn)mpR

（3）過(guò)程①可采用的操作方法是（______）（填字母代號(hào)）

A．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化 B．大腸桿菌轉(zhuǎn)化 C．顯微注射 D．細(xì)胞融合

（4）為檢測(cè)人乳鐵蛋白是否成功表達(dá)，可采用（______）（填字母代號(hào)）技術(shù)。

A．核酸分子雜交 B． 基因序列分析 C．抗原—抗體雜交 D． PCR

（5）基因工程的四個(gè)基本操作步驟是_____________、_______________、_______________和_______________。

Answer 1

【答案】 HindⅢ和BamHⅠ 氨芐青霉素 A C C 獲取目的基因 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞 目的基因的檢測(cè)與鑒定

【解析】試題分析：分析題圖，圖示是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線(xiàn)，包括基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等步驟，其中過(guò)程①是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞；過(guò)程②需采用胚胎移植技術(shù)。

（1）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位點(diǎn)，其中限制酶SmaI的切割位點(diǎn)位于目的基因上，所以獲取目的基因和構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)用限制酶HindⅢ和BamHⅠ。用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割質(zhì)粒后，會(huì)破壞質(zhì)粒上的四環(huán)素抗性基因，但不會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行。

（2）啟動(dòng)子是能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列，故選A。

（3）過(guò)程①是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，當(dāng)受體細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法，故選C。

（4）為檢測(cè)人乳鐵蛋白是否成功表達(dá)，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)。

（5）基因工程的四個(gè)基本步驟是目的基因的獲取、構(gòu)建基因表達(dá)載體、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。