Question

【題目】pBV220質粒是被廣泛應用的大腸桿菌載體，結構如下圖所示。其中PRPL是啟動子，rrB是基因轉錄終止信號，Ampr是氨芐青霉素抗性基因，ori是質粒復制起點，EcoRⅠ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ、Pst Ⅰ均為限制性內切酶。回答下列問題：

（1）從圖中可看出，pBV220作為運載體具備的條件有________________。

（2）將目的基因與此質粒構建基因表達載體時，通常用圖中____________兩種限制酶切割此質粒，其優點是______________________。用這兩種酶可以切開此質粒的_____個磷酸二酯鍵，并且會____（填“消耗”或“產生”）同樣數量的水分子。

（3）將構建好的基因表達載體導入大腸桿菌前，需用__處理大腸桿菌，使之成為________細胞，以提高轉化效率。目的基因是否成功導入大腸桿菌，可采用___________進行檢測。

Answer 1

【答案】 具有多個限制酶的切割位點、具有標記基因 EcoRⅠ、Hind Ⅲ 防止質粒切割后自身環化 4 消耗 Ca2+ 感受態 DNA分子雜交技術

【解析】試題分析：基因工程技術的基本步驟：
1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術；（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）從圖中可看出，pBV220作為運載體具備的條件有具有多個限制性內切酶的切割位點（便于目的基因的插入）、標記基因（便于鑒定和篩選含有目的基因的受體細胞）。

（2）將目的基因與此質粒構建基因表達載體時，通常用圖中EcoRⅠ、HindⅢ兩種限制酶切割此質粒，這兩種酶切割產生的末端不同，可以防止質粒切割后自身環化。用這兩種酶可以切開此質粒的4個磷酸二酯鍵，同時且消耗4個水分子。

（3）基因表達載體導入大腸桿菌前，需用Ca2+處理大腸桿菌，使之成為感受態細胞，以提高轉化效率。目的基因是否成功導入大腸桿菌，可采用DNA分子雜交技術進行檢測。