Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）菊花組織培養的部分過程如下圖：

（1）過程①利用_______（較高/較低）滲透壓，使原生質體產量大幅度提高，但存活率卻因此而降低，分析降低的原因可能是______________。過程②細胞壁形成后，可逐漸__________滲透壓。

（2）幼苗莖段帶葉，就會帶有_______，也就有了分生組織，所以不通過________階段就可直接形成叢狀苗。過程③應在______________（從具體功能角度）培養基中進行，全過程對光照要求是________。

A.早期每天24h光照，后期每天24h黑暗

B.每天一定時長的光照

C.早期每天24h黑暗，后期每天24h光照

D.每天24h黑暗

（二）請回答下列有關轉基因問題：

（1）利用圖示質粒和目的基因培育轉基因醋化醋桿菌。圖中標注了相關限制性核酸內切酶的識別序列和酶切位點，其中酶切位點相同的酶不重復標注。

（1）利用圖示質粒和目的基因構建重組質粒，應選用_____________兩種限制酶切割。若用Sau3AⅠ、BclⅠ與許多圖示質粒混合，每個質粒將會有1個或多個位點被切開，最多可能獲得_______種大小不同的DNA片段。在首次篩選轉入了重組質粒的醋化醋桿菌時，可用________取0.1mL醋化醋桿菌懸液，涂布在添加了___________的培養基來篩選。配制該培養基時，通常加入_______來調節滲透壓。當成功選出所需菌種進行醋酸發酵時，發酵瓶中的醋化醋桿菌通常用鋸末或刨花等材料_________化。

（2）利用轉基因技術（目的基因能1個或多個導入并整合到受體細胞染色體上）獲得抗蟲（E）除草劑（T）的大豆植株甲，若甲自交F1中抗蟲抗除草劑：抗蟲不抗除草劑：不抗蟲抗除草劑=11:4:1.則導入受體細胞的基因E和T分別至少有幾個？___________。

A.1、1 B.1、2 C.2、1 D.2、2

Answer 1

【答案】 較高 過度失水損傷/死亡 降低 腋芽/芽 愈傷組織/脫分化 發芽/生芽 B BamHⅠ、HindⅢ 7 移液器/移液管/取樣器 四環素 甘露醇 固定 C

【解析】試題分析：本題主要考查植物組織培養、基因工程和基因自由組合定律。要求學生熟知植物組織培養的過程、基因工程中限制酶的選擇以及基因自由組合定律的應用。

（一）（1）過程①為菊花幼苗莖切斷得到原生質體，可以利用較高的滲透壓，但滲透壓較高后，會導致細胞過度失水損傷/死亡，從而使原生質體產量大幅度提高，但存活率卻因此而降低。因此過程②細胞壁形成后，可逐漸降低滲透壓。

（2）幼苗莖段帶葉，就會帶有腋芽/芽，也就有了分生組織，所以不通過愈傷組織階段就可直接形成叢狀苗。過程③應在發芽培養基中進行，全過程對光照要求是每天一定時長的光照。

（二）（1）質粒若采用BclⅠ限制酶，會破壞全部的標記基因。因此質粒只能采用BamHⅠ、HindⅢ切割。能被BclⅠ識別的序列，也能被Sau3AⅠ識別，兩者切割后的末端一致。能被BamHⅠ識別的序列，也能被Sau3AⅠ識別，但兩者切割后的末端不一致。因此在質粒中，Sau3AⅠ、BclⅠ存在三個酶切位點，若每個質粒將會有1個或多個位點被切開，最多可能獲得7種大小不同的DNA片段，即三個位點全部切割，會有3種，其中兩個位點被切割，有3種，一個位點被切割，有1種。在首次篩選轉入了重組質粒的醋化醋桿菌時，可用移液器取0.1mL醋化醋桿菌懸液，由于在構建基因表達載體時，破壞了氨芐親霉素抗性基因，因此應將其涂布在添加了四環素的培養基中篩選。配制該培養基時，通常加入甘露醇來調節滲透壓。當成功選出所需菌種進行醋酸發酵時，發酵瓶中的醋化醋桿菌通常用鋸末或刨花等材料固定化。

（2）甲自交F1中抗蟲:不抗蟲=15:1，說明抗蟲性狀受兩對等位基因控制。甲自交F1中抗除草劑：不抗除草劑=3:1，說明抗除草劑性狀受一對等位基因控制。