Question

【題目】欲研究細胞在培養瓶中培養適當時間后，產生的細胞總數、集落數與原培養細胞濃度的關系（集落是指貼壁生長的細胞增殖6代以上形成的細胞群體，肉眼可見），請完善實驗思路，預測實驗結果并進行分析與討論。

村料與用具：未知濃度的X細胞懸液，動物細胞培養液，培養瓶若干，C02培養箱，血細胞計數板，顯微鏡，移液器，胰蛋白酶，染色劑等。

（要求與說明:細胞和集落計數、染色等具體過程不作要求，所用試劑的劑量不作要求，營養均滿足要求，各種條件適宜）

（1）完善實驗思路：

①____________________；

②據思路①，用動物細胞培養液稀釋獲得1000個/5mL、800個/5mL、600個/5mL、400個/5mL、200個/5mL、100個/5mL6種濃度的X細胞懸液；

③分別取5mL上述配制的6種濃度的X細胞懸液加到培養瓶中，每種濃度設若干重復樣品，放入CO2培養箱中培養3周后，去除培養液并染色；

④____________________；

⑤____________________；

⑥____________________。

（2）預測實驗結果：

若已知200個/5mL至800個/5mL濃度間，產生的集落數與原培養細胞濃度呈線性關系，但低于200個/5mL或高于800個/5mL的濃度將會偏離，請建立一個坐標系并畫出集落數與原培養細胞濃度關系曲線。

（3）分析與討論：

①高于800個/5mL的濃度會偏離線性關系的原因是_________________。

②低于200個/5mL會偏離線性關系的原因是___________，欲解決這種情況，可預先在培養瓶中制備一層_________細胞，以支持生長來提高效率。

Answer 1

【答案】 ①用血細胞計數板和顯微鏡對X細胞懸液計數，確定其濃度 對每個培養瓶的集落進行計數，記錄數據（并取平均值） 各培養瓶（或另取培養瓶）用胰蛋白酶液處理（集落）并稀釋，再用血細胞計數板和顯微鏡計數 對所得數據進行統計和處理 多個細胞共同形成集落/集落有重疊 濃度太低，有些細胞死亡/不能存活/不能貼壁，不能培養形成集落 滋養/飼養層/(胚胎）成纖維

【解析】試題分析：本題主要圍繞實驗考查動物細胞培養。要求學生熟知實驗過程的描述、自變量與無關變量的設置，以及因變量的測量。

（1）①本實驗欲研究細胞在培養瓶中培養適當時間后，產生的細胞總數、集落數與原培養細胞濃度的關系，因此實驗前，須測量原培養液細胞濃度，測量的方式采用血細胞計數板和顯微鏡

④培養完后，需對每個培養瓶的集落進行計數，記錄數據（并取平均值）

⑤集落是指貼壁生長的細胞增殖6代以上形成的細胞群體，所以測量細胞數，還需要將各培養瓶（或另取培養瓶）用胰蛋白酶液處理（集落）并稀釋，再用血細胞計數板和顯微鏡計數

⑥最后對所得數據進行統計和處理

（2）描述的是產生的集落數與原培養細胞濃度的關系，因此曲線圖橫坐標為濃度，縱坐標為集落數。圖中必須描述出低于200個/5mL或高于800個/5mL的濃度將會偏離正常曲線，因此曲線圖為

（3）①高于800個/5mL的濃度會偏離線性關系的原因是集落有重疊。

②低于200個/5mL會偏離線性關系的原因是濃度太低，有些細胞死亡，欲解決這種情況，可預先在培養瓶中制備一層滋養細胞，以支持生長來提高效率。