Question

【題目】研究人員將抗鹽基因轉入普通煙草培育出抗鹽煙草，該過程所用的質粒與含抗鹽基因的DNA上相關限制酶的酶切位點分別如圖1、圖2所示。限制性核酸內切酶BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT。圖3表示該過程中利用含目的基因的農桿菌進行轉化作用的示意圖。請回答下列問題。

（1）圖1質粒中沒有標注出來的基本結構是 。

（2）用圖中質粒和目的基因構建基因表達載體時，應選用限制酶 切割質粒，選用 限制酶切割含目的基因的DNA片段。限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的 鍵。

（3）將上述切開的質粒與目的基因混合，加入DNA連接酶連接后，導入受體受體細胞，受體細胞的類型（對兩種抗生素表現出抗性R或敏感性S）包含 （不考慮基因突變）。

①XR、YR ②XR、YS ③XS、YR ④XS、YS

（4）將圖3過程 （填序號）中發生了基因重組，過程②、③所用的培養基中，通常要調控好 兩類激素的比例。

（5）從個體水平鑒定抗鹽轉基因煙草是否培育成功的方法是 。

Answer 1

【答案】（8分）（1）復制原點（2）BamHI Sau3AI（或BamHI、Sau3AI） 磷酸二酯

（3）①②④（4）①生長素和細胞分裂素

（5）用一定濃度鹽水澆灌轉基因幼苗或將其移栽到鹽堿地中觀察其生長狀態

【解析】（1）圖中質粒的結構中有啟動子、標記基因、終止子，沒有復制原點。

（2）由于目的基因要表達的話，必須插入啟動子與終止子之間，所以不能用BclⅠ進行切割。又因為BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ三種限制酶切割漏出來的粘性末端是相同的，所以應該用BamHI切割質粒，用BamHI、Sau3AI切割目的基因。限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（3）將上述切開的質粒與目的基因混合，加入DNA連接酶連接后，導入受體受體細胞的可能有重組質粒或質粒，重組質粒含有X抗生素抗性基因，所以受體細胞可能抗X而對Y敏感，②正確；也可能抗X和抗R，①正確；如果質粒中經過BamHI和Sau3AI切割后X被切掉的話，則重組質粒不含兩種抗性基因，所以受體細胞可能兩種抗性都沒有，④正確。

（4）圖3中①過程通過農桿菌轉化法將目的基因導入受體細胞，實現了不同生物的基因重新組合。過程②、③表示是植物組織培養過程，該過程中需要調控好生長素和細胞分裂素的比例。

（5）從個體水平鑒定抗鹽轉基因煙草是否培育成功的方法是用一定濃度鹽水澆灌轉基因幼苗或將其移栽到鹽堿地中觀察其生長狀態。