Question

【題目】以下是生物學技術制備抗體的兩個途徑模式簡圖。

（1）上圖中過程①的完成采用的方法有 ，依據的生物學原理 ；

（2）過程④要用到的酶是 ，過程⑥進行時一般用 處理細胞，使其處于 。

上圖中的質粒本身含有氨芐青霉素抗性基因和M、N兩種限制酶（兩種酶切割序列完全不同）切割位點。若用限制酶M和N切割，通過凝膠電泳分離，分析得如下表。

分子量（kb）	1．0	2．0	3．0	4．0	5．0	6．0	7．0	8．0	9．0	10．0
酶M	+	+	+
酶N	+	+
酶M+酶N	+	+	+	+	+

凝膠電泳結果（１kb=1000對堿基，+表示檢測到該片段的存在

（3）該質粒長度為 kb，在該質粒中，M酶與N酶的切割點分別有 、 個。

（4）氨芐青霉素抗性基因的作用是 。

（5）在表達載體中，啟動子的作用是 識別和結合的部位，驅動V1基因的轉錄。

Answer 1

【答案】（1）用聚乙二醇（PEG）（滅活的病毒） 細胞膜具有流動性

（2）逆轉錄酶 鈣離子 感受態

（3）16 3 2

（4）作為標記基因（鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的受體細胞篩選出來）

（5）RNA聚合酶

【解析】

試題分析：（1）誘導動物細胞融合的方法有三種：生物方法（滅活的病毒）、化學方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（離心，震動，電刺激），其原理是細胞膜的流動性；

（2）過程④是逆轉錄，要用到的酶主要有逆轉錄酶、DNA聚合酶；將基因表達載體導入大腸桿菌之前，一般要先用Ca2+處理細胞，使細胞處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態，這種細胞稱為感受態細胞，這種方法就稱為感受態法；

（3）M酶將質粒切成三段，分別為1kb、5kb、10kb，因為質粒為環狀DNA，要切成三段就一定要有三個切點，共有16kb；N酶將質粒切成二段，分別為7kb、9kb，應有二個切點，共有16kb；

（4）氨芐青霉素抗性基因在基因工程作為標記基因，用來鑒別和篩選含有目的基因的細胞；

（5）在表達載體中，啟動子的作用是使RNA聚合酶與啟動子結合，驅動V1基因轉錄出mRNA。