Question

【題目】下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復標注。請回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識別序 列及切 割位點

(1)用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用________兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過________酶作用后獲得重組質粒。為了擴增重組質粒，需將其轉入處于________態的大腸桿菌。

(2)為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養基中添加________，平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中______________。

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為_______，對于該部位，這兩種酶________(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開。

(4)若用Sau3AⅠ切圖1質粒最多可能獲得________種大小不同的DNA片段。

Answer 1

【答案】（1）BclI和HindⅢ 連接 感受

（2）四環素 引物甲和引物丙

（3）都不能

（4）7

【解析】（1）選擇的限制酶在目的基因的兩側都應該有切割位點，又因為用BamHⅠ酶會將兩個標記基因都破壞，所以構建基因表達載體時只能選擇BclI和HindⅢ對質粒和目的基因進行切割，漏出兩種不同的粘性末端，再利用DNA連接酶將兩者定向連接。再將重組質粒導入感受態的大腸桿菌進行擴增。

（2）由于構建重組質粒的時候，氨芐青霉素抗性基因被破壞，而四環素的抗性基因沒有被破壞，所以為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養基中添加四環素。根據圖2可知對目的基因進行擴增時的引物應該是引物甲和引物丙。

（3）根據表格中堿基分析，若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為，對于該部位，這兩種酶都不能切開。

（4）根據表格分析可知Sau3A I可以切割BclI和BamHⅠ的切割位點，所以若用Sau3A I切圖1質粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。