Question

【題目】為獲取可降解高鹽度工業廢水中有機物的耐鹽菌，研究人員進行了如下實驗： ①制備含3%NaCl的固體培養基，以及含3%、5%和7%NaCl以高鹽度工業廢水中有機物為碳源的液體培養基；
②將高鹽度廢水采用平板劃線法接種于含3%Nacl的固體培養基，如圖一．然后置于適宜條件下培養一段時間，觀察形成的菌落特征；
③將分離純化后的菌株接種到試管固體斜面培養基上，適宜條件下培養適當時間，將該試管短期保藏待用；
④取固體斜面上的菌株制成菌液，取等量菌液，分別加入到步驟①中制備的3組液體培養基中搖床培養35小時，定時取樣統計活菌數目．測定結果如圖二所示．

回答下列問題：
（1）配制培養基時，滅菌、添加NaCl溶液和調節pH的先后順序是 ．
（2）步驟②平板劃線操作過程中，第一次劃線前灼燒接種環的目的是防止雜菌污染，第二次及之后的幾次劃線前灼燒接種環的目的是 ． 完成圖一所示操作，至少需要灼燒接種環次．
（3）步驟④中統計活菌數目用法，該方法統計的活菌數（填“大于”、“等于”或“小于”）實際數值．直接從靜置的培養液中取樣計數的做法是錯誤的，正確的操作是 ． 若每種濃度設3個重復實驗，每次統計活菌數目時需要從個培養瓶中取樣．
（4）由圖二可知，該耐鹽菌最適合處理含 （濃度）NaCl的廢水．

Answer 1

【答案】
（1）添加NaCI溶液、調節pH、滅菌
（2）殺死上次劃線后接種環上殘留的菌種（使下一次劃線時,接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端）；6
（3）稀釋涂布平板；小于；將培養液搖勻后取樣計數；9
（4）3%
【解析】】解：（1）配制培養基時，需待各種營養成分配制完成后再調節pH，最后進行滅菌．（2）平板劃線操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；劃線操作結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者．由于圖1中有5次劃線，每次劃線完需灼燒，再加上第一步灼燒，故完成圖一所示操作，至少需要灼燒接種環6次．（3）據實驗操作可知，步驟④中常采用稀釋涂布平板法統計活菌數目．用稀釋涂布平板法統計菌落數目時，由于培養過程中兩個或多個細胞可能生長在一起形成一個菌落，導致統計的菌落數往往比活菌的實際數目低．取樣時不能直接從靜置的培養液中取樣計數，需將培養液搖勻后取樣計數．由于每種濃度設3個重復實驗，共有3種不同濃度，故每次統計活菌數目時，需要從9個培養瓶中取樣．（4）由圖二可知，該耐鹽菌 在3% NaCl最多，故最適合處理含 3% NaCl的廢水．

所以答案是：（1）添加NaCI溶液、調節pH、滅菌（2）殺死上次劃線后接種環上殘留的菌種（使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端） 6（3）稀釋涂布平板法 將培養液搖勻后取樣計數 9（4）3% 適當延長處理時間（增大接種量）