下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖。請據(jù)圖回答：
⑴過程①和②必需用到的酶是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。綠色熒光蛋白基因在豬體內(nèi)表達(dá)的步驟是＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿。
⑵重組質(zhì)粒除了帶有綠色熒光蛋白基因以外，還必須含有＿＿＿＿＿＿＿＿＿才能構(gòu)成一個完整的基因表達(dá)載體。
⑶為了獲得更多的豬卵母細(xì)胞，可通過對母豬注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法來達(dá)到目的。
⑷將所采集到的卵母細(xì)胞在體外通過顯微操作將其＿＿＿＿＿＿＿＿＿去除并形成重組細(xì)胞，然后再通過＿＿＿＿＿＿＿技術(shù)培養(yǎng)成早期胚胎。
（5）早期胚胎的培養(yǎng)液成分較復(fù)雜，除一些無機鹽和有機物外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分，以及＿＿＿＿＿＿＿等物質(zhì)。
科目：高中生物 來源： 題型：
分析回答有關(guān)生物工程中的問題：
日本下村修、美國沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白（GFP）等方面的突出貢獻(xiàn)，獲得2008年度諾貝爾化學(xué)獎。下圖為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖．據(jù)圖回答：
（1）綠色熒光蛋白基因在該實驗中是做為________基因。圖中通過過程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒。限制性內(nèi)切酶I的識別序列和切點是—G’GATCC—，請畫出質(zhì)粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的過程：________________________
_________。
（2）過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時，采用最多也最有效的方法是_______________ ___。
(3)如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達(dá)的基因一起構(gòu)建到載體上，GFP基因可以作為基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因，其作用是_______________________。
(4)目前科學(xué)家們通過蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過程的正確順序是（用數(shù)字表示）：_______ ___ 。
①推測藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白。
(5)在培養(yǎng)重組細(xì)胞時，培養(yǎng)液中通常含有_____________、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。
(6)以上培育過程中應(yīng)用到的生物技術(shù)有_________________________________等（至少答出三項）。
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科目：高中生物 來源：2010年安徽省合肥市第一中學(xué)高二下學(xué)期期中考試生物卷 題型：綜合題
(7分)我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬在東北農(nóng)業(yè)大學(xué)的種豬場自然分娩產(chǎn)出，這標(biāo)志著我國在轉(zhuǎn)基因克隆豬技術(shù)領(lǐng)域已達(dá)到世界領(lǐng)先水平。下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，請據(jù)圖回答：
(1)過
程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。重組質(zhì)粒除了帶有綠色熒光蛋白基因以外，還必須含有＿＿＿＿、＿＿＿＿、＿＿＿＿等才能構(gòu)成一個完整的基因表達(dá)載體。
(2)將所采集到的卵母細(xì)胞在體外培養(yǎng)到＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通過顯微操作將其細(xì)胞核去除并形成重組細(xì)胞，然后再通過＿＿＿＿＿＿＿＿技術(shù)培養(yǎng)成早期胚胎。
(3)早期胚胎的培養(yǎng)液成分較復(fù)雜，人們對細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，通常加入＿＿＿＿等一些天然成分。
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科目：高中生物 來源：2013屆海南省高二下學(xué)期期中考試生物試卷（解析版） 題型：綜合題
2008年諾貝爾化學(xué)獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家。綠色熒光蛋白能在藍(lán)光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部的移動情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能。下圖為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，據(jù)圖回答：
注：圖中通過過程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒。限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側(cè)各有1個酶Ⅱ的切點。
（1）在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來 ，理由是： 。
（2）過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時，采用最多的方法是 。
（3）如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達(dá)的基因一起構(gòu)建到載體上，GFP基因可以作為基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因，其作用是 。獲得的轉(zhuǎn)基因克隆豬，可以解決的醫(yī)學(xué)難題是，可以避免 。
（4）目前科學(xué)家們通過蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過程的正確順序是： （用數(shù)字表示）。
①推測藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計序列
③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）
④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白。
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科目：高中生物 來源：2010-2011學(xué)年吉林省高三沖刺（一）（理綜）生物部分 題型：綜合題
2008年1月7日，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)培育出我國第二代綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬。研究人員是先從一種特殊水母中提取綠色熒光蛋白基因，然后把該基因經(jīng)過處理后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)的豬胎兒成纖維細(xì)胞的基因組中，再把轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到成熟的去核豬卵母細(xì)胞中構(gòu)建成轉(zhuǎn)基因胚胎。再經(jīng)過手術(shù)移植入受體母豬，經(jīng)過發(fā)育最終獲得綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬。
下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖。請據(jù)圖回答：
（1）過程①和②必需用到的酶是 。
（2）重組質(zhì)粒除了帶有綠色熒光蛋白基因以外，還必須含有 才能構(gòu)成一個完整的基因表達(dá)載體。
（3）為了獲得更多的豬卵母細(xì)胞，可通過對母豬注射 的方法，做超數(shù)排卵處理，并將所采集到的卵母細(xì)胞在體外培養(yǎng)到 期即可通過顯微操作將其細(xì)胞核去除。
（4）早期胚胎的培養(yǎng)液成分較復(fù)雜，除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素．激素．氨基酸．核苷酸等營養(yǎng)成分，以及 等物質(zhì)。
（5）如果想同時得到多頭綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬，可通過胚胎分割技術(shù)得以實現(xiàn)。但應(yīng)選擇發(fā)育良好．形態(tài)正常的 期胚胎進(jìn)行操作，且要注意 ，否則會影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。
（6）與一般的繁育良種動物方式相比較，胎胎移植的優(yōu)勢是 。
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科目：高中生物 來源：2010年廣東省汕頭市高二下學(xué)期期中試題生物卷 題型：綜合題
2008年諾貝爾化學(xué)獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白(GFP)方面做出突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家。綠色熒光蛋白能在藍(lán)光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部的移動情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能。我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬在東北農(nóng)業(yè)大學(xué)的種豬場自然分娩產(chǎn)出，這標(biāo)志著我國在轉(zhuǎn)基因克隆豬技術(shù)領(lǐng)域已達(dá)到世界領(lǐng)先水平。下圖為我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，請據(jù)圖回答：
（1）圖中通過過程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒。若限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是一G↓GATCC一，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC一。在質(zhì)粒上有酶I的一個切點，在目的基因的兩側(cè)各有1個酶Ⅱ的切點。
①請畫出質(zhì)粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。
②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來? ＿＿＿＿＿。理由是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）GFP基因與目的基因一起構(gòu)建到載體上不影響目的基因的表達(dá)，也不影響由目的基因控制合成的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能,且對細(xì)胞無毒性作用，因此GFP基因可以運用作為基因表達(dá)載體上的＿＿＿＿＿＿。
（3）過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。然后還要通過＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿技術(shù)來檢測綠色熒光蛋白基因是否已重組到豬胎兒成纖維細(xì)胞的染色體DNA上。
（4）為了獲得更多的豬卵母細(xì)胞，可通過對母豬注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法，做超數(shù)排卵處理，并將所采集到的卵母細(xì)胞在體外培養(yǎng)到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通過顯微操作將其細(xì)胞核去除。
（5）早期胚胎的培養(yǎng)液成分較復(fù)雜，除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素、激素、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿等物質(zhì)。
（6）綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程屬于＿＿＿＿＿＿生殖。目前科學(xué)家們通過蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過程的正確順序是：＿＿＿＿＿＿(用數(shù)字表示)。
①推測藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計
③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾(合成)
④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白
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