Question

【題目】乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白，免疫接種實驗表明這兩種蛋白質(zhì)都可引起實驗動物的免疫反應。科研人員用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因番茄，用于生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗，回答下列問題：

（1）T1蛋白和T2蛋白進入實驗動物的腸道后，會被實驗動物小腸黏膜上的一種M細胞當做_________處理，進而引發(fā)一系列的免疫反應，最終產(chǎn)生相應的_________________，使實驗動物獲得了對乙肝病毒的免疫能力。

（2）用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗（含T1蛋白），所用的目的基因是____________，所用的運載體是土壤農(nóng)桿菌的________________。

（3）可利用PCR技術(shù)擴增目的基因，其前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成_________。PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，目的基因在乙肝病毒DNA中的位置如圖所示，則在____________（填“第一次”、“第二次”或“第三次”）次循環(huán)結(jié)束后，即可出現(xiàn)兩條鏈等長的目的基因片斷。

（4）獲得轉(zhuǎn)基因番茄植株后，通過分子檢測，已確定該植株所結(jié)番茄中含有T2蛋白，此后還需要進行個體生物學水平的鑒定，例如___________________________________。

Answer 1

【答案】 抗原 記憶細胞（抗體和記憶細胞） T1蛋白基因 Ti質(zhì)粒 引物 第三次 用轉(zhuǎn)基因番茄植株生產(chǎn)的T2蛋白對實驗動物進行免疫接種實驗 。

【解析】試題分析： 1、目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。2、PCR的原理是DNA雙鏈復制；擴增過程是在較高溫度下進行的，因此需要加入耐高溫的DNA聚合酶（或Taq酶）。利用PCR技術(shù)擴增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。3、農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA具有可轉(zhuǎn)移到受體細胞并整合到受體細胞的染色體DNA上的特點，因此攜帶外源基因的DNA片段必須插入到T-DNA片段（內(nèi)部）部位。

（1）T1蛋白和T2蛋白是乙肝病毒表面的蛋白質(zhì)，進入實驗動物的腸道后，會被當做抗原處理，進而引發(fā)一系列的免疫反應，最終產(chǎn)生相應的記憶細胞和抗體。

（2）用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗（含T1蛋白），目的基因的產(chǎn)物是T1蛋白，因此所用的目的基因是T1蛋白基因。根據(jù)題干中“用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因番茄”可知：所用的運載體是土壤農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒。

（3）PCR技術(shù)擴增的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物。
由圖分析可知：

X基因第一次復制得到兩個兩種DNA片段：①和②；

X基因第二次復制得到四個四種DNA片段：①復制得①和③、②復制得②和④；

X基因第三次復制得到八個五種DNA片段：①復制得①和③、③復制得③和⑤、②復制得②和④、④復制得④和⑤。

結(jié)合上圖進行分析：在第三次次循環(huán)結(jié)束后，即可出現(xiàn)兩條鏈等長的目的基因（⑤）片斷。（4）獲得轉(zhuǎn)基因番茄植株后，通過分子檢測，已確定該植株所結(jié)番茄中含有T2蛋白。根據(jù)題干“乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白，免疫接種實驗表明這兩種蛋白質(zhì)都可引起實驗動物的免疫反應”，因此在個體生物學水平上，用轉(zhuǎn)基因番茄植株生產(chǎn)的T2蛋白對實驗動物進行免疫接種實驗來鑒定。