Question

【題目】反義基因是通過產生的mRNA分子，與相關基因產生的mRNA進行互補，來阻斷非正常蛋白質合成。圖1為不同的限制酶及相應的切割位點。圖2為科學實驗中利用小分子量的A反義基因的實例。據圖回答下列問題：

（1）基因工程中，A基因可以用_______（儀器）合成,利用該儀器還可以合成______等。若想將圖2中的A基因反向連接到結構甲中，應該用_____________限制酶切割A基因和結構甲。DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，_____________可以“縫合”平末端和黏性末端。

（2）用含A反義基因的農桿菌感染植物細胞的原生質體后，可用含有________的培養基進行篩選。培養一段時間后，在高濃度的蔗糖溶液中，觀察細胞_________ 來鑒別細胞壁是否再生。

（3）導入的A反義基因能轉錄A反義RNA，且能與正常RNA互補，抑制A基因表達過程中的__________ 。

Answer 1

【答案】DNA合成儀 引物（或探針） EcoRI或BamHI T4DNA連接酶 抗生素 是否發生質壁分離 翻譯

【解析】

基因工程技術的基本步驟：1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成；2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法；4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術；（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）基因工程中，DNA合成儀利用化學方法人工合成目的基因，利用該儀器還可以合成引物（或探針）等。A基因和結構甲都有EcoRI和BamHI的切割位點，切割A基因，不破壞目的基因，切割結構甲不破壞標記基因，故將圖2中的A基因反向連接到結構甲中，應該用EcoRI或BamHI限制酶切割A基因和結構甲。T4DNA連接酶可以“縫合”平末端和黏性末端。

（2）結構甲中含有抗生素抗性基因，可以抗抗生素，故用含A反義基因的農桿菌感染植物細胞的原生質體后，可用含有抗生素的培養基進行篩選。培養一段時間后，在高濃度的蔗糖溶液中，觀察細胞是否發生質壁分離來鑒別細胞壁是否再生。

（3）基因的 表達分為轉錄和翻譯，翻譯是以mRNA作為模板，氨基酸為原料合成蛋白質的過程，導入的A反義基因能轉錄A反義RNA，且能與正常RNA互補，使其不能提供翻譯模板，故抑制A基因的翻譯。