Question

【題目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫用價值，只能從人血漿中制備。圖一是以基因工程技術獲取重組HSA的兩條途徑，其中報告基因表達的產物能催化無色物質K呈現藍色。圖二為相關限制酶的識別序列和切割位點，以及HAS基因兩側的核苷酸序列。據圖回答下列問題：

（1）依據圖一和圖二分析，在構建基因表達載體時下列敘述錯誤的是（_____）

A．應該使用酶B和酶C獲取HSA基因

B．應該使用酶A和酶B切割Ti質粒

C．成功建構的重組質粒含1個酶A的識別位點

D．成功建構的重組質粒用酶C處理將得到2個DNA片段

（2）PCR技術應用的原理是____________，在利用該技術獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用____________尋找HSA基因的位置并進行擴增。

（3）圖一過程①中需將植物細胞與___________混合后共同培養，旨在讓___________整合到植物細胞染色體DNA上；除盡農桿菌后，還須轉接到含____________的培養基上篩選出轉化的植物細胞。

（4）圖一③過程中將目的基因導入綿羊受體細胞，采用最多，也是最為有效的方法是______________。

（5）為檢測HSA基因的表達情況，可提取受體細胞的 __________________，用抗血清白蛋白的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】C DNA(雙鏈)復制 引物 農桿菌 T-DNA 無色物質K 顯微注射技術 蛋白質

【解析】

基因工程的操作步驟：

1、獲得目的基因（目的基因的獲取）

①從自然界中己有的物種中分離出來，如可從基因文庫中獲取。
②用人工的方法合成。
獲得原核細胞的目的基因可采取直接分離，獲取真核細胞的目的基因般人工合成。

人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法。

③利用PCR技術擴增目的基因
PCR的含義：是一項在生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術。

原理：DNA雙鏈復制

2、制備重組DNA分子（基因表達載體的構建）

①重組DNA分子的組成：除了目的基因外，還必須有標記基因。

②方法：同種限制酶分別切割載體和目的基因，再用DNA連接酶把兩者連接。

3、轉化受體細胞（將目的基因導入受體細胞）
①轉化的概念：是且的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩定和衣達的過程。 ②常用的轉化方法：

將目的基因導入植物細胞：采用最多的方法是農桿菌介導轉化技術(農桿菌轉化法)，其次還有基因槍法和花粉管通道技術(花粉管通道法)。

將目的基因導入動物細胞：最常用的方法是顯微注射技術。此方法的受休細胞多為受精卵；將目的基因導入微生物細胞： Ca2+處理法。
4、目的基因的檢測與鑒定
①首先要檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術。

②其次還要檢測目的基因是否轉錄出mRNA，方法是采用分子雜交技術。

③最后檢測目的基因是翻譯成蛋白質，方法是采用抗原一抗體雜交技術。

④講行個休生物學鑒定。

（1）

A、由圖中DNA序列和酶切位點序列可知應使用酶B和酶C切割獲取HSA基因，A正確；

B、導入的目的基因時應在T-DNA上，因此Ti質粒應用酶A和酶B切割，因為酶A和酶C切出的黏性末端也能互補配對，可以將目的基因連接進去，B正確；

C、成功建構的重組質粒含2個酶A的識別位點，C錯誤；

D、成功構建的重組質粒用酶C處理能得到2個DNA片段，應是A-C，和C-A片段，D正確。

故選C。

（2）PCR技術應用的原理是DNA(雙鏈)復制，在利用該技術獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用引物尋找HSA基因的位置并進行擴增。

（3）圖一過程①中需將植物細胞與農桿菌混合后共同培養，利用農桿菌的侵染特性，讓T-DNA整合到植物細胞染色體DNA上；除盡農桿菌后，為了篩選出轉化的植物細胞，利用重組質粒上的報告基因表達的產物能催化無色物質K呈現藍色的特性，進行篩選，故還須將植物細胞轉接到含無色物質K的培養基上。

（4）圖一③過程中將目的基因導入綿羊受體細胞，通常采用較多的方法是顯微注射技術。

（5）為檢測HSA基因的表達情況，可利用抗原抗體雜交技術，具體做法是：提取受體細胞的蛋白質，用抗血清白蛋白的抗體做雜交實驗。