Question

【題目】下表中甲、乙分別是分離兩種土壤中微生物的培養基的配方，圖丙所示為相關分離過程。請回答下列問題（注：水解酪素，即水解酪蛋白，由酪蛋白水解得到）：

KH2PO4	1.4g	纖維素粉	5.0g
Na2HPO4	2.1g	NaNO3	1.0g
MgSO4·7H2O	0.2g	Na2HPO4	1.2g
葡萄糖	10.0g	KH2PO4	0.9g
尿素	1.0g	MgSO4·7H2O	0.5g
瓊脂	15.0g	KCl	0.5g
		酵母膏	0.5g
		水解酪素	0.5g
將上述物質溶解后，用蒸餾水定容到1000mL		將上述物質溶解后，用蒸餾水定容到1000mL
甲		乙

（1）甲培養基中提供氮源的物質是________。

（2）如果將乙培養基配制成固體培養基，則在該培養基上長出的菌落是否都能分解纖維素？________（填“是”或“否”）。如果培養基中加入________可以篩選出具有分解纖維素能力的菌株，同時透明圈越________（填“大”或“小”），表示該菌分解纖維素的能力越強。

（3）為了計數微生物的數量，圖丙采用_______法進行接種培養計數，除此之外，還可以采用_______法進行計數。其中前一種計數方法所得結果要比后一種計數方法所得結果_____（填“大”或“小”）。

（4）一位同學利用圖丙的方法步驟在4個平板培養基上分別接種0.1mL土壤稀釋液④，培養后菌落數分別為180、155、176、129個，則每克土壤樣品中微生物數量約為________________個。

Answer 1

【答案】尿素 否 剛果紅 大 稀釋涂布平板 顯微鏡直接計數（或血球計數板計數） 小 1.6×108個

【解析】

本題旨在考查培養基的基本成分，纖維素分解菌的的分離與統計等知識。相關知識：1稀釋涂布法當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，其統計的菌落數往往比活菌的實際數目低，計算公式為每克樣品中的菌株數 = （C÷V）×M。.2.在含有纖維素的培養基中加人剛果紅時，剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅—纖維素的復合物就無法形成，培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，就可以通過是否產生透明圈來篩選出具有分解纖維素能力的菌株；可通過觀察透明圈大小判斷菌株分解纖維素的能力，透明圈越大，纖維素被分解的就越多，說明菌株分解纖維素的能力越強。

（1）培養基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物質）、氮源（提供氮元素的物質）和無機鹽。其中氮源一般是含氮的化合物，根據甲培養基的配方，甲培養基中提供氮源的物質是尿素。

（2）如果將乙培養基配制成固體培養基，則在該培養基上長出的菌落不一定都能分解纖維素，有可能利用水解酪素等能提供碳源，也有可能纖維素被分解后產生的糖類等也可為其它微生物生長提供碳源等。如果在含有纖維素的培養基中加人剛果紅時，剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅—纖維素的復合物就無法形成，培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，就可以通過是否產生透明圈來篩選出具有分解纖維素能力的菌株；同時透明圈越大，表示該菌分解纖維素的能力越強。

（3）純化微生物可以用稀釋涂布法和平板劃線法，其中稀釋涂布法能用于微生物的計數。稀釋涂布法統計的菌落數往往比活菌的實際數目低，這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。除了上述的活菌計數法外，顯微鏡直接計數（或血球計數板計數）也是測定微生物數量的常用方法。所以，圖丙采用了稀釋涂布法進行接種培養計數，除此之外，還可以采用顯微鏡直接計數法進行計數。其中前一種計數方法所得結果要比后一種計數方法所得結果小。

（4）為了保證結果準確，稀釋涂布法統計一般選擇菌落數在30~300的平板進行計數。一位同學利用圖丙的方法步驟在4個平板培養基上分別接種0.1mL土壤稀釋液④，培養后菌落數分別為180、155、176、129個，四個數值都符合統計要求，稀釋倍數為106倍，則每克土壤樣品中微生物=（180+155+176+129）/4×106=1.6×108個。