Question

【題目】【生物一選修1生物技術實踐】下面是篩選抗鏈酶素大腸桿菌的實驗步驟及相關圖解。

實驗步驟：

①把大量對鏈酶素敏感的大腸桿菌接種在不含鏈霉素的培養基1的表面，進行培養。

②待其長出密集的小菌落后，用影印法接種到不含鏈霉素的培養基2上，隨即再影印到含有鏈霉素的培養基3上，進行培養。

③在培養基3上出現了個別抗鏈霉素的菌落，將其挑選出。

請回答：

（1）配制培養基時除了滿足基本的營養條件外，還需滿足微生物生長對特殊營養物質、_______、_________的要求。

（2）從功能上看，含有鏈霉素的培養基屬于_________培養基。若在培養基中加入伊紅和美藍，則培養皿中長出的菌落顏色為_________。由圖可知，1號培養基接種的方法為_________。

（3）對2和3進行比較，在2上找到與3上相應的菌落，挑取其中一個菌落接種到_________（含鏈霉素/不含鏈霉素）的培養基上，如果有較多的菌落出現，則說明該抗性基因突變發生在該菌接觸鏈霉素之_________（前/后）。

（4）3中的菌落比1、2中的菌落少很多，這說明了基因突變具有_________的特點。

Answer 1

【答案】 pH 氧氣 選擇 黑色 稀釋涂布平板法 含鏈霉素 前 頻率低/低頻性

【解析】試題分析：影印法接種的具體過程是：將待測的濃縮菌懸液涂在合適的平板上，等其長好后作為母平板（每平板上的菌落控制在50～300個）；用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構成印章（即接種工具）；然后把長有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養基的平板上輕輕印一下，經培養后，選擇培養基平板上長出的菌落與母平板上的菌落位置對應，比較影印平板與母平板上菌落生長情況，即可從相應位置的母平板上選出待測的突變型菌落．影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發的、與相應的環境因素無關而設計的實驗，目前已廣泛應用于營養缺陷型的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中。

（1）配制基在提供幾種主要營養物質的基礎上，還需滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。

（2）鏈霉素是抗生素，對大腸桿菌具有選擇作用。在伊紅和美藍培養基上，大腸桿菌菌落菌落顏色為黑色。由圖可知，1號培養基接種的方法為稀釋涂布平板法。

（3）培養基2和培養基3上相同的菌落，是具有抗鏈霉素性狀的大腸桿菌，將其中一個菌落接種到含鏈霉素的培養基上，出現較多的菌落，則說明該抗性基因突變發生在該菌接觸鏈霉素之前。

(4)抗鏈霉素性狀是大腸桿菌基因突變獲得的性狀，3號培養皿中的菌落比1號、2號中的菌落少很多，這說明了基因突變頻率很低。