Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）銹去津是一種含氮的有機化合物，它是廣泛使用的除草劑之一。銹去津在土壤中不易降解，為修復被其污染的土壤，按下面程序選育能降解銹去津的細菌（目的菌）。已知銹去津在水中溶解度低，含過量銹去津的固體培養(yǎng)基不透明。

回答下列問題：

（1）為選取能降解銹去津的細菌，應選取____土壤樣品加____（A．蒸餾水 B．清水 C．生理鹽水 D．無菌水）制備成土壤浸出液。

（2）本實驗中將細菌接種到固體培養(yǎng)基所用的接種方法為____，接種后的培養(yǎng)皿倒置后置于____中培養(yǎng)一段時間后，觀察菌落特征。

（3）測得A～C瓶中三類細菌的最大密度如下圖所示：

由圖推斷，從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)的目的是____并提高其密度；甲類細菌密度迅速降低的主要原因是____；

（4）圖中固體培養(yǎng)基上，____菌落即為目的菌落。

（二）綠色熒光蛋白基因（GFP）被發(fā)現(xiàn)以來，一直作為一個監(jiān)測完整細胞和組織內(nèi)基因表達及蛋白質位置的理想標記。回答下列問題：

幾種限制酶識別序列及切割位點表

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是—T TCGA，N端伸出的核苷酸的堿基序列是—C TGCA，則在構建含該GFP的重組質粒A時，應選用限制酶____，對____進行切割。

（2）重組質粒A常通過 ____法導入到豬胎兒成纖維細胞。

（3）檢測GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上，可在熒光顯微鏡下觀察的表達。圖中綠色熒光蛋白轉基因克隆豬中GFP既是____，也是____。

（4）綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程中涉及到多項現(xiàn)代生物技術，圖中⑤⑥⑦過程屬于____技術，⑨過程通常選用____個細胞以上的早期胚胎進行移植。

Answer 1

【答案】使用過銹去津 D 涂布接種法 恒溫培養(yǎng)箱 篩選或選擇目的菌 培養(yǎng)液中缺少甲類細菌可利用的氮源（或有氧條件抑制了甲類細菌的生長） 有透明帶 HindⅢ和PstⅠ Ti質粒和目的基因（或Ti質粒） 顯微注射 目的基因 標記基因 核移植 8

【解析】

（一）選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物生長。圖中從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)的目的是擴大培養(yǎng)，篩選目的菌。

（二）圖中①表示目的基因獲取，②表示用限制酶切割質粒，③表示基因表達載體構建，④表示將目的基因導入受體細胞，⑤表示將豬胎兒成纖維細胞提取細胞核，⑥表示將豬卵母細胞去除細胞核，⑦表示核移植，⑧表示動物細胞培養(yǎng)，⑨表示胚胎移植。

（一）

（1）為選取能降解銹去津的細菌，將銹去津作為唯一氮源，選取使用過銹去津土壤樣品加無菌水制備成土壤浸出液。

（2）本實驗中使用的是涂布接種法，接種后的培養(yǎng)皿倒置后置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

（3）由圖可知從A瓶到C瓶，甲類細菌變少，乙丙細菌增多，以此篩選目的菌并提高其密度；甲類細菌密度迅速降低的主要原因是培養(yǎng)液中缺少甲類細菌可利用的氮源。

（4）菌落有透明帶，說明銹去津被細菌分泌的酶降解，可篩選出目的菌。

（二）

（1）從圖示可知，GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是TTCGA，是限制酶HindⅢ酶的切割位點；N端伸出的核苷酸的堿基序列是CTGCA，是限制酶PstⅠ切割位點；則在構建含該GFP的重組質粒A時，應選用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割目的基因和質粒，再用DNA連接酶把目的基因和運載體相連。

（2）重組質粒A常通過顯微注射法導入到豬胎兒成纖維細胞。

（3）據(jù)圖可知最終要得到綠色熒光豬，因此GFP是目的基因，由于GFP能合成綠色熒光蛋白，可據(jù)此檢測GFP是否成功導入細胞，作為標記基因。

（4）綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程中涉及到基因工程、核移植和胚胎移植，圖中⑤⑥⑦過程屬于核移植技術，⑨過程通常選用8個細胞以上的早期胚胎進行移植。