Question

【題目】利用基因工程技術培育轉基因抗凍番茄.該過程需要用多種限制酶,下圖依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三種限制酶的識別序列及切割位點.

請回答:

（1）上述限制酶在特定位點切割DNA,其實質是斷開DNA分子每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的_______切割后產生了____________末端.

（2）利用EcoR I 和NAE 酶切得某種魚的抗凍蛋白基因,可與被EcoR I 和Sam I酶切后的質料連接成重組質料,原因是___________

（3）重組質料導入番茄后,欲檢測抗凍蛋白基因是否轉錄出mRNA,需利用__________作探針.

（4）利用抗凍蛋白制備出相應的__________,然后進行抗原-抗體雜交,觀察到雜交帶出現,尚不足以確定轉基因抗凍番茄培育是否成功.因此,還應將轉基因番茄__________,以確定其耐寒能力是否提高.

Answer 1

【答案】 磷酸二酯鍵 黏性末端和平末端 相同的黏性末端之間可連接，且不同的平末端之間也可以連接 標記的含有目的基因的DNA片段（或“標記的抗凍蛋白基因”或“標記的含有目的基因的DNA單鏈”） 抗體 置于寒冷環境培養（或進行個體水平檢測或進行抗凍實驗）

【解析】注：（2）（3）錯字“質料”

試題分析：基因工程的基本操作程序主要包括四個步驟：目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定，其中基因表達載體的構建是基因工程的核心。基因工程常用的工具有工具酶和運載體，工具酶包括限制酶和DNA連接酶，運載體包括質粒、動植物病毒和噬菌體衍生物。

（1）限制酶能夠識別特定的DNA脫氧核苷酸序列，并在特定的位點進行切割，作用的化學鍵是磷酸二脂鍵。據圖分析，上述三種酶切割后分別產生了黏性末端、平末端、平末端。

（2）相同的黏性末端之間可連接，且不同的平末端之間也可以連接，所以利用EcoR I 和NAE 酶切得某種魚的抗凍蛋白基因，可與被EcoR I 和Sam I酶切后的質粒連接成重組質粒。

（3）檢測基因表達產物mRNA，可以用分子雜交法，即用標記的含有目的基因的DNA片段作為探針，與目的mRNA雜交。

（4）利用抗凍蛋白制備出相應的抗體，然后進行抗原-抗體雜交，觀察到雜交帶出現，尚不足以確定轉基因抗凍番茄培育是否成功。因此,還應將轉基因番茄置于寒冷環境培養，以確定其耐寒能力是否提高。