Question

【題目】下圖是某同學分離和培養洗衣機中微生物的部分操作步驟和實驗結果示意圖。

（1）圖1所示操作為倒平板，此時培養基溫度約為______℃，若用該培養基培養洗衣機中滋生的細菌時，除考慮各種營養條件外，還要考慮______和滲透壓等條件(至少寫兩個)。

（2）圖2所示接種方法是______，從圖示信息看，操作中存在錯誤的步驟是______(用字母表示)。操作過程中，接種環需要灼燒滅菌的次數是______次。

（3）將以上接種后的平板置于培養箱中培養時，需倒置的原因是______。

（4）在檢測洗衣機的污垢中是否含微生物時，也有同學先將污垢制成一定濃度的水樣溶液，然后用移液槍取0.1 mL菌液滴入平板，并用涂布器涂布到固體培養基的表面進行培養，這種接種方法稱為______。培養一段時間后，該同學統計發現培養皿中共有57個菌落(如圖3)，他認為0.1 mL菌液中含有的細菌實際數很可能大于57個，其依據是______。

（5）實驗結束后，使用過的培養基應該進行滅菌處理才能倒掉，此目的是______。

Answer 1

【答案】50溫度、pH、氧氣、無菌等平板劃線法C6防止皿蓋上凝結的水珠落入培養皿造成污染稀釋涂布平板法疊在一起的兩個或多個細菌形成了一個菌落防止造成環境污染

【解析】

平板劃線操作：①將接種環放在火焰上灼燒，直到接種環燒紅；②在火焰旁冷卻接種環，并打開棉塞；③將試管口通過火焰；④將己冷卻的接種環伸入菌液中，沾取一環菌液；⑤將試管口通過火餡，并塞上棉塞；⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環迅速伸入平板內，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養基；⑦灼燒接種環，待其冷卻后，從第一區域劃線的末端開始往第二區域內劃線。重復以上操作，在三、四、五區域內劃線。注意不要將最后一區的劃線與第一區相連。

涂布平板操作：①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中；②取少量菌液（不超過0.1mL），滴加到培養基表面；③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8~10s；④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養基表面。涂布時可轉動培養皿，使菌液分布均勻。

（1）培養基溫度為50℃，倒平板比較合適。溫度過低時，瓊脂容易凝固，不利倒平板；溫度過高時倒平板，會在培養基表面形成大量冷凝水，影響使用。細菌生長繁殖的條件有：①充足的營養；②適宜的溫度；③合適的酸堿度；④必要的氣體環境；⑤無菌的條件；⑥適宜的滲透壓等。

（2）圖2所示是平板劃線接種操作示意圖，操作順序是A→B→E→D→C→F。其中操作錯誤的步驟是C，該步驟應在酒精燈火焰旁操作。平板劃線法中有以下幾種情況需要對接種環進行灼燒滅菌。①取菌種前灼燒接種環是為了殺死接種環上原有微生物。②從第二次開始，每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線后接種環上殘留菌種，使下次劃線的菌種直接來自于上次劃線末端，使每次劃線菌種數目減少，達到分離菌株的目的。③接種結束后灼燒接種環是為了殺死接種環上殘存的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。由圖2可知，共在平板劃線5次，因此接種環需要灼燒滅菌6次。

（3）為了防止皿蓋上凝結的水珠落入培養基造成污染，因此將以上接種后的平板置于培養箱中培養時需倒置。

（4）同學先將污垢制成一定濃度的水樣溶液，然后用移液槍取0.1 mL菌液滴入平板，并用涂布器涂布到固體培養基的表面進行培養，這種方法稱為稀釋涂布平板法。當兩個或多個細菌連在一起，平板上只觀察到一個菌落。因此，0.1 mL菌液中含有的細菌實際數很可能大于57個。

（5）實驗結束后，為了避免細菌污染環境，使用過的培養基應該進行滅菌處理才能倒掉。