Question

【題目】下圖表示培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。圖中tetR表示四環素抗性基因,ampR表示氨芐青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點。請據圖回答:

(1)質粒載體作為基因工程的工具,應具備的基本條件有_____________(答出兩點即可)。圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體,需用____和____限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是____。

(2)過程①可采用的操作方法是________。

(3)對早期胚胎進行切割,經過程②可獲得多個新個體,這利用了細胞的______性。

(4)為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達,可采用________技術。

Answer 1

【答案】 能自我復制、具有標記基因、具有一個至多個限制酶切割位點 Hind Ⅲ BamHⅠ 啟動子 顯微注射法 全能 抗原-抗體雜交

【解析】分析題圖，圖示是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線，包括基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、早期胚胎培養、胚胎移植等步驟，其中過程①是將重組質粒導入受體細胞；過程②需采用胚胎移植技術。

（1）質粒作為運載體，應具備的基本條件有：能自我復制、具有標記基因、能啟動外源目的基因的轉錄和翻譯、具有一個至多個限制酶切割位點等。質粒上含有限制酶BamHⅠ、HindⅢ的切割位點，外源DNA分子上含有限制酶BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ的切割位點，其中限制酶SmaⅠ的切割位點位于目的基因上，所以獲取目的基因和構建基因表達載體時，應用限制酶HindⅢ和BamHⅠ。重組質粒上的啟動子是能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列。

（2）根據以上分析已知，過程①是將重組質粒導入受體細胞（受精卵），常用顯微注射法。

（3）胚胎分割技術的理論基礎是細胞的全能性。

（4）目的基因成功表達的產物是人乳鐵蛋白，可采用抗原-抗體雜交技術進行檢測。