Question

【題目】（四）回答基因工程的相關問題：

如表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖24、圖25中標注了相關限制酶的酶切位點，請回答下列問題：

【1】用圖24、25中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用BclI酶和_________酶切割，酶切后的質粒和目的基因片段，通過______________ 酶作用后獲得重組質粒。

【2】若用上述限制酶獲得的目的基因長度為1.0 kb（1 kb = 1000對堿基），質粒長度為3.2 kb，則獲得重組質粒的長度為______。

A. < 4.2 kb B. > 4.2 kb C. = 4.2 kb

【3】重組質粒成功導入受體細胞的概率一般僅在10-7，為了篩選出導入了重組質粒的大腸桿菌，在導入完成后，將所有大腸桿菌分別在含有四環素和氨芐青霉素的培養基中培養，大腸桿菌在兩種培養基的生長狀況不可能的是______，可能性最大的是______。

A. 在含氨芐青霉素的培養基上能正常生長,在含四環素的培養基上不能正常生長

B. 在含四環素的培養基上能正常生長,在含氨芐青霉素的培養基上不能正常生長

C. 在含氨芐青霉素的培養基和含四環素的培養基上都能正常生長

D. 在含氨芐青霉素的培養基和含四環素的培養基上都不能正常生長

【4】用Sau3A I限制酶______（填 能或不能）識別并切割BamHI酶的識別序列，若用Sau3A I限制酶完全切割圖24質粒時，可獲得__________種大小不同的DNA片段。

【5】若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達產物，則需將重組質粒導入至山羊的________________細胞中，那么上述過程屬于_______。

Answer 1

【答案】

【1】HindⅢDNA連接酶

【2】A

【3】AD

【4】能3

【5】受精卵B

【解析】分析圖24：外源DNA上含有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3AI的切割位點，其中限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的識別序列都能被Sau3kI識別。分析圖25：質粒上有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII三種限制酶的識別序列和切割位點，其中BamHⅠ的切割位點位于兩種抗生素抗性基因上.選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但使用BamHⅠ可能破壞質粒中的兩種抗性基因，BclI和HindⅢ都只會破壞氨芐青霉素抗性基因，四環素抗性基因完好，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割。

【1】選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但使用BamHⅠ可能破壞質粒中的兩種抗性基因，BclI和HindⅢ都只會破壞氨芐青霉素抗性基因，四環素抗性基因完好，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割．酶切后的載體和目的基因片段，通過連接酶作用后獲得重組質粒。

【2】質粒被BclI和HindⅢ切割后，會丟失兩種酶切割位點之間的一段DNA，參與形成重組質粒的質粒長度<3.2kb，因此獲得重組質粒的長度<1+3.2=4.2kb，故選A。

【3】在形成重組質粒時，破壞了氨芐青霉素抗性基因，但四環素抗性基因完好。成功導入重組質粒的理想大腸桿菌，應該具有四環素抗性特性，不具有抗氨芐青霉素特性，即在含四環素的培養基上能正常生長，在含氨芐青霉素的培養基上不能正常生長；但重組質粒成功導入受體細胞的概率一般僅在10-7，因此可能出現含有重組質粒的大腸桿菌、不含有重組質粒的大腸桿菌。因此將所有大腸桿菌分別在含有四環素和氨芐青霉素的培養基中培養，大腸桿菌在兩種培養基的生長狀況不可能的是在含氨芐青霉素的培養基上能正常生長，在含四環素的培養基上不能正常生長，因為含有重組質粒的大腸桿菌中氨芐青霉素抗性基因已被破壞了，但四環素抗性基因完好，因此肯定具有四環素抗性特性；不含有重組質粒的大腸桿菌都不具有抗性特性；又因為重組質粒成功導入受體細胞的概率一般僅在10-7，成功概率較小，大多數大腸桿菌是不含有重組質粒，因此可能性最大的在含氨芐青霉素的培養基和含四環素的培養基上都不能正常生長。

【4】根據表格中信息可知：BamHI酶識別和切割序列為，Sau3kI識別和切割的序列，可知BamHI酶的識別序列包含有Sau3kI識別的序列，因此用Sau3AI限制酶能識別并切割BamHI酶的識別序列。由此類推可知：限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的識別序列都能被Sau3kI識別，因此用Sau3kI完全切割圖質粒可獲得3種大小不同的DNA片段。

【5】將目的基因導入動物細胞中，通常以受精卵作為受體細胞．該技術是動物基因工程的范疇。