Question

【題目】 “地溝油，城市下水道里悄悄流淌的垃圾”。地溝油最大的來源為城市飯店下水道的隔油池。對(duì)地溝油的處理是一個(gè)難題，用脂肪酶處理地溝油具有廣泛的應(yīng)用前景。為獲得高產(chǎn)脂肪酶的菌株，并將之用于產(chǎn)業(yè)化，某研究小組進(jìn)行了一些實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列相關(guān)問題：

(1)欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細(xì)菌，應(yīng)配制________碳源的培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基從功能上看屬于_____________培養(yǎng)基。

(2)經(jīng)過稀釋，在平板上接入0.1 mL稀釋液并涂布，經(jīng)適當(dāng)時(shí)間培養(yǎng)后，在平板上計(jì)數(shù)菌落，據(jù)此可計(jì)算出每毫升培養(yǎng)液中的活菌數(shù)。這種計(jì)數(shù)方法得到的結(jié)果一般比實(shí)際值偏小，原因可能有________________________________________________________（至少答兩點(diǎn)4分）。

(3)經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)得到如下表所示的結(jié)果，為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇________稀釋倍數(shù)的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。有同學(xué)認(rèn)為稀釋操作時(shí)，可以將1 mL培養(yǎng)液加適量無菌水直接稀釋至上述稀釋倍數(shù)，這樣可以簡(jiǎn)化步驟，省去梯度稀釋的麻煩。你認(rèn)為這種方法是否合理并說明理由。___________________

稀釋倍數(shù)	101	102	103	104	105	106
培養(yǎng) 結(jié)果
計(jì)數(shù)(平均值)	難以計(jì)數(shù)	難以計(jì)數(shù)	難以計(jì)數(shù)	159	17	2

Answer 1

【答案】以脂肪為唯一(碳源) 選擇 有的菌落是由2個(gè)以上的細(xì)菌形成的、涂布器上還殘留少量細(xì)菌 104 不合理(否) ，在做梯度稀釋之前不能確定這個(gè)稀釋倍數(shù)的每個(gè)平板的菌落是否在30～300之間

【解析】

1、培養(yǎng)基按功能劃分：分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基；

選擇培養(yǎng)基（1）、特點(diǎn)：培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需的微生物的生長(zhǎng)。（2）、應(yīng)用：培養(yǎng)、分離出特定微生物（如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基用于分離含有脂肪酶的細(xì)菌）；

鑒別培養(yǎng)基（1）、特點(diǎn)：根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品。（2）、應(yīng)用：鑒別不同種類的微生物（如可用伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否含有大腸桿菌）。

2、微生物的計(jì)數(shù)方法包括顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法（常用稀釋涂布平板法）。稀釋涂布平板法的理論依據(jù)：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落即代表一個(gè)活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，每個(gè)稀釋倍數(shù)至少涂布3個(gè)平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，取平均值。

(1) 欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細(xì)菌，要在培養(yǎng)基中加入特定的碳源，應(yīng)配制以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基從功能上看屬于選擇培養(yǎng)基。

(2)在平板上接入稀釋液并涂布，培養(yǎng)后，在平板上計(jì)數(shù)菌落，據(jù)此計(jì)算每毫升培養(yǎng)液中的活菌數(shù)。由于可能有的菌落是由2個(gè)及2個(gè)以上的細(xì)菌形成的，也可能涂布器上還殘留少量細(xì)菌，故這種計(jì)數(shù)方法得到的結(jié)果一般比實(shí)際值偏小。

(3) 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇104稀釋倍數(shù)，稀釋操作時(shí)，將1 mL培養(yǎng)液加適量無菌水直接稀釋至上述稀釋倍數(shù)，因?yàn)樵谧鎏荻认♂屩�前不能確定這個(gè)稀釋倍數(shù)的每個(gè)平板的菌落是否在30～300之間，故這種方法不合理。