Question

【題目】若長期使用某種除草劑（有機物），會對土壤造成嚴重污染。如圖是從土壤中分離出能降解該除草劑菌株的實驗過程。請回答下列問題：

選擇土壤→土壤樣品選擇培養劃線純化獲得菌種

（1）為了獲取能降解該除草劑的菌株，選擇的土壤樣品應來自____________。

（2）圖中A過程所用的培養基中不能添加其他有機物，理由是____________。若圖中B過程在一個平板的5個區域內劃線，則劃線工具需灼燒滅菌____________次。

（3）圖中A、B、C過程所用培養基中應含有四類營養成分，即_______________________。

（4）若要推算該土壤樣品中的細菌含量，應采用____________法進行接種。先將1 mL 土壤溶液稀釋100倍，然后隨機選取6個滅菌處理的平板，其中4個平板上分別接入 0.1 mL稀釋液，2個平板未接入稀釋液，經適當培養后，6個平板上的菌落數分別為52、49、51、48、0和0。

①由未接入稀釋液的平板所長菌落情況，可得出的結論是________________________。

②經計算可得出每毫升土壤溶液中的活菌數為____________個，該結果往往偏小，原因是____________。

Answer 1

【答案】 被該除草劑嚴重污染的土壤 選擇培養基中除草劑為唯一碳源，其他有機物也屬于碳源 6 水、無機鹽、碳源和氮源 稀釋徐布平板 平板（培養基）未被污染 5.0×104 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只有一個菌落

【解析】試題分析：為了從土壤中分離出能降解該除草劑的菌株，常常需要從曾被該除草劑嚴重污染過的土壤提取樣品才可能含有該分解菌。通過人工配制選擇培養基，即只含該除草劑為唯一碳源的培養基，目的只允許目的菌株生長和繁殖，而不能利用除草劑的微生物則遭到淘汰。再經過平板劃線法或者稀釋涂布平板法進行接種培養、分離、純化。若還需要對樣品中該菌進行計數，則只能用稀釋涂布平板法接種、培養、計數。

（1）由于只有被除草劑污染過的土壤才可能含有分解該除草劑的分解菌，所以為了獲取能降解該除草劑的菌株，最好從被該除草劑嚴重污染的土壤采集土壤樣品。

（2）結合前面的分析可知，為了淘汰不能分解該除草劑的微生物，而僅保留能分解除草劑的菌種，則在配制選擇培養基時應只含除草劑作為唯一碳源，若添加了其他有機物，則碳源不唯一而達不到篩選目的，所以圖中A過程所用的培養基中不能添加其他有機物。由于每次劃線之前都要灼燒一次且劃線結束后也要灼燒滅菌，所以圖中B過程在一個平板的5個區域內劃線，則劃線工具需灼燒滅菌6次。

（3）普通培養基中都應含有四類營養成分，即水、無機鹽、碳源和氮源。

（4）若要推算該土壤樣品中的細菌含量，應采用稀釋涂布平板法進行接種，若采用平板劃線法只能分離純化菌種，而不能通過數菌落來推算樣品中目的菌含量。實驗過程中，為了檢查平板培養基滅菌是否合格，常常需要留一個空白培養基平板不接種，觀察是否有菌落生成。結合題意，根據0.1mL稀釋100倍的菌液接種培養得到的4個平板的菌落數計算：每毫升土壤溶液中的活菌數=（52+49+51+48）÷4÷0.1×100= 5.0×104個。由于稀釋涂布平板法得到的菌落常常存在是兩個或多個細菌連在一起而最后在平板上只觀察到一個菌落的情況，所以估算值比實際值要小。