Question

【題目】為探究SHH基因與角化囊腫發生的相關性，科研人員利用SHH基因的非模板鏈轉錄合成的RNA作為探針，進行分子雜交實驗，以檢測SHH基因在角化囊腫中的表達情況。其基本流程如下圖(Amp表示氨芐青霉素抗性基因；LacZ基因被SHH基因插入后不表達)。

請回答：

(1)重組載體中SHH基因轉錄合成RNA探針時，________(填“需要”或“不需要”)啟動子。

(2)步驟②中，用Ca2＋處理大腸桿菌，使之成為________細胞，然后導入重組載體。實驗中，用添加氨芐青霉素的培養基培養大腸桿菌，未導入質粒的細菌將會死亡，原因是這些細菌不含有________基因。

(3)能表達LacZ基因的大腸桿菌在含有IPTG和Xgal的培養基上會形成藍色菌落，易于識別。根據上述原理可以初步判斷____(填“藍色”或“白色”)菌落中的大腸桿菌為重組菌。

(4)將制備的探針加入角化囊腫切片中，探針將與__________形成雜交帶，進而判斷SHH基因的轉錄情況。

Answer 1

【答案】 需要 感受態 Amp(或氨芐青霉素抗性或抗性) 白色 SHH轉錄的mRNA(只寫mRNA不對)

【解析】(1)啟動子是RNA聚合酶的識別位點，任何基因的表達(轉錄)均需要啟動子。(2)大腸桿菌細胞用Ca2＋處理后就成為感受態細胞；能在添加氨芐青霉素的培養基上生存的細菌含有氨芐青霉素抗性基因，沒有氨芐青霉素抗性基因的細菌將會死亡。(3)能表達LacZ基因的大腸桿菌在含有IPTG和Xgal的培養基上會形成藍色菌落，而重組菌中LacZ基因被SHH基因插入后不表達，重組菌在含有IPTG和Xgal的培養基上會形成白色菌落。(4)判斷SHH基因的轉錄情況，也就是判斷SHH基因是否轉錄出mRNA。