Question

【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列。現有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4種限制性核酸內切它們識別的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。

（1）若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段，其產物長度分別為___________________。若圖1中虛線方框內的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變為基因d。從隱形純合子中分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，產物中共有___________種不同長度的DNA片段。

（2）為了提高試驗成功率，需要通過_________技術擴增目的基因，以獲得目的基因的大量拷貝。該方法也是檢測________多樣性的最簡單方法。

（3）若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是____________。

（4）為了篩選出成功導入含目的基因D的重組質粒的大腸桿菌，首先將大腸桿菌在含___________的培養基上培養，得到如圖3的菌落。再將滅菌絨布按到培養基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含__________的培養基上培養，得到如圖4的結果（空圈表示與圖3對照無菌落的位置）。請在圖3中圈出一個含目的基因的重組質粒的大腸桿菌的菌落。_________

（5）在選出的大腸桿菌內基因D能成功表達的原因是__________________。其表達產物是一條多肽鏈，如考慮終止密碼，則其至少含有的氧原子數為___________。

Answer 1

【答案】537、790、661 2 PCR 遺傳 BamH1 抗生素B 抗生素A 生物共用一套遺傳密碼子 340

【解析】

（1）根據圖1中的酶切位點，可判斷用限制酶SmaⅠ完全切割該DNA片段，其產物長度為537bp、790bp、661bp。若圖1中虛線方框內的堿基對被T-A堿基對替換，基因D就突變為基因d，那么基因d上只有一個限制酶SmaⅠ切割位點，被限制酶SmaⅠ切割的產物長度為534+796-3=1327kb、658+3=661bp。因此從隱性純合子（dd）分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產物中共有2種不同DNA片段。
（2）為了提高試驗成功率，需要通過PCR技術擴增目的基因，以獲得目的基因的大量拷貝．該方法也是檢測遺傳多樣性的最簡單方法。
（3）由圖1可知，目的基因兩側是GGATCC序列，該序列是限制酶BamHⅠ的識別序列，因此要將質粒和目的基因D連接形成重組質粒，應選用限制酶BamHⅠ切割。
（4）用限制酶BamHⅠ切割質粒后，用限制酶BamHⅠ切割破壞了抗生素A抗性基因，但沒有破環抗生素B抗性基因，因此首先用含有抗生素B的培養基培養大腸桿菌，能生存下來的是含有普通質粒和重組質粒的大腸桿菌；再用含有抗生素A的培養基培養，能生存下來的是含有普通質粒的大腸桿菌。最后能在培養皿1上生存，但不能在培養皿2上生存的大腸桿菌菌落進行培養，即可得到含重組質粒的大腸桿菌。圖4中空心圈在圖3中對應的位置是含目的基因的重組質粒的大腸桿菌的菌落，一個含目的基因的重組質粒的大腸桿菌的菌落如圖所示：。
（5）不同生物共用一套遺傳密碼子，所以基因D能再大腸桿菌內成功表達。基因D含有1020對堿基，最多能翻譯形成含有1020÷3-1（終止密碼子）=339個氨基酸的多肽鏈。多肽鏈含有O原子數=肽鍵數+2肽鏈數+R基中的O原子數，所以該多肽至少含有O原子數為338+2×1=340個。