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【題目】下圖1為生產HIV單克隆抗體的過程,圖2為運用基因工程技術生產HIV疫苗的操作簡要路徑。 據圖分析回答。

(1)圖1中, 過程①稱為_____________技術,通過過程②獲得的雜交瘤細胞還需要進行 ___________________ ,以便獲得足夠數量的能分泌所需抗體的細胞。

(2)圖2中, 過程①需要用到________酶。一個DNA片段進行擴增最簡便的方法是使用PCR技術,如果這個過程中消耗了引物62個,則共進行了______輪的DNA復制。

(3)圖2所示的運用基因工程技術生產的HIV疫苗還不能有效用于艾滋病預防,原因是________________________________________。

(4)用限制酶處理DNA片段,可使特定核苷酸序列特定部位的_____________鍵斷開。若用X、Y兩種限制酶作用于圖2中的DNA片段,并進行電泳分析,其結果如下圖。A至D選項中,關于兩種酶切位置的判斷, 正確的是____。

【答案】 (動物)細胞融合 克隆化培養和抗體檢測 逆轉錄 5 艾滋病病毒為單鏈RNA病毒,變異頻率高 磷酸二酯 B

【解析】根據圖1中生產HIV單克隆抗體的過程分析,HIV自愈者的免疫細胞和骨髓瘤細胞經過程①的誘導融合得到雜交細胞,再經過程②的篩選克隆培養和抗體陽性檢測),得到既能產生特異性抗體又能無限增殖的雜交瘤細胞,收集所需的單克隆抗體。圖2為運用基因工程技術生產HIV疫苗的操作簡要路徑,首先提取HIV的RNA片段,經逆轉錄過程(①),得到DNA片段,再將含疫苗基因的DNA片段插入(②)到質粒中,構建出基因表達載體;然后將含疫苗基因的重組質粒導入(③)到酵母菌細胞內,通過檢測和鑒定能產生疫苗的酵母菌,提取HIV疫苗。

(1)根據前面的分析可知,圖1中過程①稱為動物細胞融合技術和過程②融合實驗完成后,經過克隆化培養和抗體陽性檢測,以便獲得足夠數量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。

(2)根據前面的分析可知,圖2中過程①是逆轉錄過程,需要用到逆轉錄酶。一個DNA片段進行PCR技術擴增,如果這個過程中共消耗了引物62個,則第一次消耗2個引物;第二次則消耗4個引物,第三次消耗8個引物,以此類推,第四次消耗16個,第五次消耗32個,累計剛好總消耗2+4+8+16+32=62個引物。

(3)通過圖2所示的基因工程技術生產的HIV疫苗常常還不能有效用于艾滋病預防,主要原因在于艾滋病病毒是單鏈RNA病毒,變異頻率高

(4)限制酶作用的化學鍵是切斷特定核苷酸之間的磷酸二酯鍵。根據電泳結果圖分析可知,若只用X一種限制酶作用于圖2中的DNA片段,產生3條不同的DNA短片段(6000、3500和500),說明限制酶X對該DNA有兩個切點;若只用Y一種限制酶作用于圖2中的DNA片段,產生2條不同的DNA短片段(8000、2000),說明限制酶Y對該DNA只有1個切點;而同時用兩種限制酶切割該DNA 片段,得到4條不同DNA短片段(4500、3500、1500和500),說明兩種限制酶對該DNA的3個切點是不重合的;分析得到的所有不同DNA短片段并與選項結合分析可知,只有B選項符合題意。

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(1)步驟①中,利用PCR技術擴增干擾素基因時,設計引物序列的主要依據是_________?蒲腥藛T還在兩種引物的一端分別加上了________________序列,以便于后續的剪切和連接。為防止酶切產物自身環化,構建表達載體需用兩種限制酶,選擇的原則是:Ti質粒內,每種限制酶有________個切割位點,酶切后,目的基因形成的兩個黏性末端序列_______(相同/不相同)

(2)步驟②所構建的基因表達載體中未標注出的必需元件還有________,步驟③中需先用________處理農桿菌以便將基因表達載體導入細胞。

(3)步驟④中,科研人員提取愈傷組織細胞的RNA后,先通過________獲得DNA,再進行PCR擴增,若最終未能檢測出干擾素基因,其可能原因是________________

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(2)乙圖中7_______________,DNA分子的基本骨架由[ ]_________[ ]_________交替連接而成;DNA分子兩條鏈上的堿基通過_____連接成堿基對,并且遵循_____________原則。

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