Question

【題目】圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，且限制酶的切點是唯一的，外源DNA插入會導致相應的基因失活，請回答下列問題。

（1）基因工程中最常用的載體是_______，而作為基因表達載體，除圖1所示結構外，還需具有___________________________。

（2）根據圖中所給信息，構建基因表達載體時，應選用的限制酶是__________________。若將基因表達載體導入大腸桿菌，一般用____________處理，使其處于_____________，以利于吸收周圍環境中的DNA分子。

（3）為了篩選含目的基因的大腸桿菌，應在培養基中添加______________，培養一段時間后，平板上長出的菌落，用PCR技術鑒定時，所用的引物組成為圖2中_____________。

Answer 1

【答案】質粒 目的基因和終止子 BclI和HindⅢ Ca2+ 感受態 四環素 引物甲和引物丙

【解析】

本題考查基因工程，考查對基因工程的工具和操作步驟的理解和識記。圖1中氨芐青霉素抗性基因和四環素抗性基因為標記基因，根據目的基因兩端限制酶的酶切位點和標記基因中的酶切位點可選擇適宜的限制酶，保證基因表達載體中至少一個標記基因正常表達。

（1）質粒是基因工程中最常用的載體，作為基因表達載體，一般應具有啟動子、終止子、目的基因和標記基因，圖1結構中缺少目的基因和終止子。

（2）根據圖中所給信息，兩個標記基因中均含有BamHⅠ的酶切位點，因此構建基因表達載體時，不能選用該酶，應選用BclI和HindⅢ。將基因表達載體導入大腸桿菌，一般用Ca2+處理，增大其細胞壁的通透性，使其處于感受態，以利于吸收周圍環境中的DNA分子。

（3）基因表達載體中，目的基因的插入導致氨芐青霉素抗性基因失活，但四環素抗性基因可以正常表達，篩選含目的基因的大腸桿菌，可在培養基中添加四環素。用PCR技術鑒定受體菌是否含有目的基因，所用的引物應分別與目的基因兩端的單鏈配對，引物應為圖2中的引物甲和引物丙。