Question

【題目】下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。請回答：

（1）天然質粒往往需經過改造才能作為基因工程中的運載體，經改造后的質粒同時具備的條件有 （填序號）。

①標記基因

②多個限制酶切割位點

③對受體細胞無害

④啟動子

⑤起始密碼子

（2）若對圖1中質粒進行改造，插入的SmaⅠ酶切位點越多，質粒的熱穩定性將會 。

（3）用圖2中的人乳鐵蛋白目的基因和圖1所示的質粒構建重組質粒時，選用的限制酶是 （從“EcoRⅠ”、“BamHⅠ/ HindⅢ”、“SmaⅠ/ HindⅢ”中選擇）。不能選擇其他限制酶的理由分別

是 、 。

（4）圖3中，①常用的導入方法是 ，為了獲得雌性轉基因牛，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行 ，③過程選用的早期胚胎應發育到 階段。

Answer 1

【答案】

（1）①②③④

（2）提高

（3）BamHⅠ/ HindⅢ 若選EcoRⅠ會破壞質粒的復制原點；若選SmaⅠ/ HindⅢ，則構建的重組質粒沒有標記基因或復制原點

（4）顯微注射法 性別鑒定 桑椹胚或囊胚

【解析】

（1）天然質粒往往需經過改造才能作為基因工程中的運載體，經改造后的質粒同時具備的條件有①標記基因、②多個限制酶切割位點、③對受體細胞無害和④啟動子，而⑤起始密碼子位于mRNA上。

（2）堿基之間的配對遵循堿基互補配對原則，即C-G，A-T，且C和G之間有3個氫鍵，A和T之間有2個氫鍵，因此C和G的含量越高，DNA分子熱穩定性也越高．SmaⅠ酶切位點中均為C-G堿基對，因此插入的SmaⅠ酶切位點越多，質粒中的C和G的含量就越高，其熱穩定性也越高。

（3）若選EcoRⅠ會破壞質粒的復制原點；若選SmaⅠ/HindⅢ，則構建的重組質粒沒有標記基因或復制原點，所以用圖2中的人乳鐵蛋白目的基因和圖1所示的質粒構建重組質粒時，選用的限制酶是BamHⅠ/HindⅢ。

（4）過程①是將目的基因導入動物受精卵，所用方法是顯微注射法；為了獲得雌性轉基因牛，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定；過程③是將早期胚胎移入代孕母體中所用技術為胚胎移植，時期是發育到桑椹胚或囊胚的早期胚胎。