Question

【題目】2008年諾貝爾化學獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白(GFP)方面做出突出貢獻的科學家。綠色熒光蛋白能在藍光或紫外光的激發下發出熒光，這樣借助GFP發出的熒光就可以跟蹤蛋白質在細胞內部的移動情況，幫助推斷蛋白質的功能。下圖為我國首例綠色熒光蛋白(GFP)轉基因克隆豬的培育過程示意圖，據圖回答：

(1)圖中通過過程①②形成重組質粒，需要限制酶切取目的基因、切割質粒。限制酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。在質粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側各有1個酶Ⅱ的切點。

①請畫出質粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

______________________________________________________________________

②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來________，理由是：__________________________________________________。

（2）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用的方法_____________。

(3)GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因，其作用是__________________。

如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構建到載體上，獲得的轉基因克隆豬，可以解決的醫學難題是避免器官移植發生________反應。

(4)目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：________(用數字表示)。

①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列

③藍色熒光蛋白基因的修飾(合成)

④表達出藍色熒光蛋白

Answer 1

【答案】(1)①

②可以 因為形成的黏性末端是相同的(或是可以互補的)

(2)顯微注射法 (3)用于重組DNA的檢測和鑒定(鑒定受體細胞中是否含有目的基因) 免疫排斥

(4)②①③④

【解析】：（1）①質粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端如圖所示：

②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的，所以能夠連接起來．

（2）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是顯微注射技術．

（3）目的基因能否在受體母豬體內穩定遺傳的關鍵是目的基因是否插入到受體細胞的染色體DNA上，這需要采用DNA分子雜交技術進行檢測才能確定．

（4）采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列、①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸、③藍色熒光蛋白基因的修飾和④表達出藍色熒光蛋白．