Question

【題目】下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的過程。圖中tetR表示四環素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點。據圖回答：

（1）為確保目的基因的完整性及與載體連接的方向性，需用___________(填酶的名稱）限制酶同時切割載體和人乳鐵蛋白基因，欲篩選出含有重組載體的大腸桿菌，需要在含_____________的培養基上進行，能驅動人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控因子是圖中的_____________________。

（2）過程①采用的操作方法通常是________________，過程②代表的生物技術是__________。對早期胚胎進行切割，經過程②可獲得多個新個體，但胚胎發育到囊胚時，要確保_____________平均分割。

（3）為檢測人乳鐵蛋白基因是否成功表達，可采用________技術，對代孕牛的要求是___________。

Answer 1

【答案】 HindⅢ和BamHⅠ 氨芐青霉素 啟動子 顯微注射技術 胚胎移植 內細胞團 抗原-抗體雜交 同種、生理狀況相同、健康體質和正常繁殖能力

【解析】試題分析：本題以圖文結合的形式考查學生對基因工程的基本操作程序、胚胎移植、胚胎分割的識記和理解能力。解答此題的關鍵是熟記并理解相關的基礎知識、形成清晰的知識網絡。在此基礎上，依據圖示中限制酶切割位點的位置等信息，準確定位數字所示過程的含義并結合題意作答。

(1) 圖中信息顯示：人乳鐵蛋白基因的兩端和載體上都有BamHⅠ和HindⅢ的酶切位點，因此將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。因人乳鐵蛋白基因的插入，使得重組載體中的四環素抗性基因（tetR）遭到破壞，但氨芐青霉素抗性基因（ampR）結構完好，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌，需要在含氨芐青霉的培養基上進行。啟動子位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，驅動基因轉錄出mRNA，據此可知：能驅動人乳鐵蛋白基因的乳腺細胞中特異性表達的調控因子是圖中的啟動子。

(2) 過程①是將重組載體導入供體牛的受精卵中，采用的操作方法通常是顯微注射技術。過程②是將早期胚胎移入受體，采用的生物技術是胚胎移植。采用胚胎分割技術對發育到囊胚時期的胚胎進行切割時，要確保內細胞團平均分割。

(3) 人乳鐵蛋白基因是目的基因，檢測目的基因是否成功表達，可采用抗原—抗體雜交技術。在胚胎移植時，對受體（代孕牛）的要求是同種、生理狀況相同、有健康的體質和正常繁殖能力。