Question

【題目】人血清白蛋白（HSA）具有重要的醫用價值。下圖是以基因工程技術獲取HSA的兩條途徑，其中報告基因表達的產物能催化無色物質K呈現藍色。回答下列問題。

（1）基因工程中可通過PCR技術擴增目的基因。生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是___________；在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是___________上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA分子雙鏈間的___________。

（2）已知堿性磷酸酶能除去核苷酸末端的5磷酸，構建表達載體的過程中用該酶處理Ti質粒，但HSA基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是___________，經過上述處理后的Ti質粒在DNA連接酶的作用下可與HSA基因之間形成___________個磷酸二酯鍵，再經相關處理獲得結構完整的重組DNA分子。

（3）過程①中需將植物細胞與農桿菌混合后共同培養后，還應轉接到含___________的培養基上篩選出轉化的植物細胞。③過程中將目的基因導入綿羊受體細胞，采用最多，也是最為有效的方法是___________，還可以使用動物病毒作為載體，實現轉化。

（4）為檢測HSA基因的表達情況，可提取受體細胞的___________，用抗血清白蛋白的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】解旋酶 加熱至90~95℃ 氫鍵 防止Ti質粒發生自身連接 2 無色物質K 顯微注射技術 蛋白質

【解析】

由圖可知，①表示將目的基因導入植物細胞，②表示植物組織培養，③表示將目的基因導入動物細胞，④需要經過早期胚胎培養及胚胎移植等。

（1）生物體細胞內的DNA復制開始時，在解旋酶的作用下可以解開DNA雙鏈；在體外利用PCR技術擴增目的基因時，加熱至90~95℃引起模板DNA解鏈為單鏈，上述兩個解鏈過程均破壞了DNA分子雙鏈間的氫鍵。

（2）為了防止Ti質粒發生自身連接，構建表達載體的過程中用該酶處理Ti質粒，但HSA基因不用堿性磷酸酶處理。目的基因兩端的序列均與質粒連接，故在DNA連接酶的作用下可與HSA基因之間形成2個磷酸二酯鍵，再經相關處理獲得結構完整的重組DNA分子。

（3）由于報告基因表達的產物能催化無色物質K呈現藍色，故過程①中需將植物細胞與農桿菌混合后共同培養后，還應轉接到含無色物質K的培養基上篩選出轉化的植物細胞。③過程常用顯微注射法將目的基因導入綿羊受體細胞，還可以使用動物病毒作為載體，實現轉化。

（4）為檢測HSA基因的表達情況，看其是否表達出HAS，可提取受體細胞的蛋白質，用抗血清白蛋白的抗體進行雜交實驗，看是否出現雜交帶。