Question

【題目】基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質粒，便于重組和篩選．已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是一G↓GATCC﹣，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是﹣↓GATC﹣．根據圖示判斷下列操作正確的是（ ）
A.目的基因和質粒均用限制酶Ⅱ切割
B.目的基因和質粒均用限制酶Ⅰ切割
C.質粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
D.質粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

Answer 1

【答案】D
【解析】解：限制酶I的識別序列和切點是﹣G↓GATCC﹣，限制酶II的識別序列和切點是﹣↓GATC﹣，可知限制酶II能夠識別和切割限制酶I切割后的黏性末端．據題圖可知，目的基因兩端分別是限制酶I的識別序列和切點是﹣G↓GATCC﹣和限制酶II的識別序列和切點是﹣↓GATC﹣，只有用限制酶II才能將目的基因切割下來．質粒有GeneI和GeneⅡ表示兩種標記基因，分別有限制酶II的識別序列和限制酶I的識別序列；如果用限制酶II切割，則GeneI 和GeneⅡ都被破壞，造成重組質粒無標記基因；用限制酶I切割，則破壞GeneⅡ，保留GeneI，其黏性末端和切割目的基因所在DNA的黏性末端相同，可以連接形成重組DNA． 故選：D．
由于限制酶Ⅱ能識別限制酶Ⅰ的識別序列，限制酶Ⅰ不能識別限制酶Ⅱ的識別序列．要將目的基因從該DNA鏈中提取出來，需要在目的基因左右切開，所以要用限制酶Ⅱ；質粒不能用限制酶Ⅱ，如果用該酶的話，質粒就會有兩個切口．