Question

【題目】編碼蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五個片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示．

回答下列問題：
（1）現要通過基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT…CAGGAAGGA），則所構建的表達載體轉入宿主細胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是 ．
（2）某同學在用PCR技術獲取DNA片段B或D的過程中，在PCR反應體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為 ， 加入了作為合成DNA的原料．
（3）現通過基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細胞增殖的作用，某同學做了如下實驗：將一定量的含T淋巴細胞的培養液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對照，培養并定期檢測T淋巴細胞濃度，結果如圖2．
①由圖2可知，當細胞濃度達到a時，添加蛋白乙的培養液中T淋巴細胞濃度不再增加，此時若要使T淋巴細胞繼續增殖，可采用的方法是 ． 細胞培養過程中，培養箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是 ．
②僅根據圖、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若缺少（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所編碼的肽段，則會降低其刺激T淋巴細胞增殖的效果．

Answer 1

【答案】
（1）因為在啟動子的下游接上的編碼蛋白乙的DNA序列，不能啟動
（2）模板DNA；4種脫氧核苷酸
（3）細胞培養（傳代培養）；維持培養液中的PH；C
【解析】解：（1）因為在啟動子的下游接上的編碼蛋白乙的DNA序列，不能啟動編碼蛋白乙的DNA序列的轉錄，因此所構建的表達載體轉入宿主細胞后不能翻譯出蛋白乙．（2）PCR技術擴增目的基因的條件需要：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）．序列甲作為模板DNA，DNA的原料為4種脫氧核苷酸．（3）①動物細胞可以通過細胞培養（傳代培養）繼續增殖．細胞培養過程中，需要氣體環境，其中氣體CO2的作用是維持培養液中的PH．②分析坐標圖：對比甲和乙蛋白刺激T淋巴細胞增殖情況發現：最終效果相當，只是增殖時間不同，可以推斷出A、E片段編碼的肽段不會降低T淋巴細胞增殖效果．將丙蛋白分別與甲和乙蛋白刺激T淋巴細胞增殖情況比較發現：丙蛋白降低了T淋巴細胞增殖．丙基因與甲和乙基因相比較，缺少了一段C基因，也就是說若缺少C片段所編碼的肽段，則會降低其刺激T淋巴細胞增殖的效果．
故答案為：（1）因為在啟動子的下游接上的編碼蛋白乙的DNA序列，不能啟動（2）模板DNA 4種脫氧核苷酸（3）細胞培養（傳代培養） 維持培養液中的PH（4）C
1、PCR技術擴增目的基因（適用于目的基因的核苷酸序列已知的情況）．PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術，其原理是DNA復制，需要模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶），以指數的方式擴增，即約2n．引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結合在核酸鏈上與之互補的區域，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點．2、基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因（1）啟動子：是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質．（2）終止子：也是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的尾端．（3）標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來．常用的標記基因是抗生素抗性基因．3、動物細胞培養條件：（1）無菌無毒環境：無菌﹣﹣對培養液和所有培養用具進行無菌處理；在細胞培養液中添加一定量的抗生素．；無毒﹣﹣定期更換培養液，防止細胞代謝產物積累對自身造成危害．（2）營養：
成分：所需營養物質與體內基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然成分．
培養基類型：合成培養基（將細胞所需的營養物質按其種類和所需數量嚴格配制而成的培養基）（3）溫度和pH值：哺乳動物多以36.5±0.5℃為宜，多數細胞生存的適宜pH為7.2～7.4．（4）氣體環境：通常采用培養皿或松蓋培養瓶，將其置于含95%空氣加5%CO2的混合氣體的培養箱中進行培養．O2：是細胞代謝所必需的 CO2主要作用是維持培養液的pH．