Question

【題目】λ噬菌體有極強的侵染能力，能在細菌中快速進行DNA復制，產生子代噬菌體，最終導致細菌破裂（稱為溶菌狀態）；或者整合到細菌基因組中潛伏起來，不產生子代噬菌體（稱為溶原狀態）。在轉基因技術中常用λ噬菌體構建基因克隆載體，使其在受體細菌中大量擴增外源DNA，以備研究使用。相關操作如下圖所示，請回答：

（1）在構建基因克隆載體時，可被噬菌體蛋白質包裝的DNA長度約為36～51kb，則經人工改造的λgtl0載體可插入的外源DNA的最大長度為______kb。為獲得較大的插入能力，可刪除λ噬菌體DNA組成中的______序列以縮短其長度。

（2）構建基因克隆載體時，需用到的酶是______。λ噬菌體DNA上通常沒有適合的標記基因，因此人工改造時需加裝適合的標記基因，如下圖λgtl0載體中的imm434基因，該基因編碼一種阻止λ噬菌體進入溶菌狀態的阻遏物。外源DNA的插入位置應位于imm434基因______（之中/之外），使經侵染培養后的受體菌處于______狀態，表明已成功導入目的基因。

（3）合成噬菌體所需的小分子原料主要是_____________。分離純化噬菌體重組DNA時，將經培養10小時左右的大腸桿菌=噬菌體的培養液超速離心，從______________（上清液、沉淀物）獲得噬菌體。

Answer 1

【答案】 7.6kb 中部 限制酶和DNA連接酶 之中 溶菌 氨基酸和脫氧核苷酸 上清液

【解析】（1）在構建基因克隆載體時，可被噬菌體蛋白質包裝的DNA長度約為36～51kb，經人工改造的λgtl0載體的DNA長度為43.4kb，則可插入的外源DNA的最大長度為7.6kb。為獲得較大的插入能力，可刪除λ噬菌體DNA組成中的中部序列（控制溶原生長）以縮短其長度。

（2）構建基因克隆載體時，需用到的酶是限制酶和DNA連接酶。由于imm434基因編碼一種阻止λ噬菌體進入溶菌狀態的阻遏物，因此外源DNA的插入位置應位于imm434基因之中，可以破壞imm434基因，使λ噬菌體能進入溶菌狀態，使經侵染培養后的受體菌處于溶菌狀態，表明已成功導入目的基因。

（3）噬菌體主要由蛋白質和DNA組成，則合成噬菌體所需的小分子原料主要是氨基酸和脫氧核苷酸。分離純化噬菌體重組DNA時，將經培養10小時左右的大腸桿菌與噬菌體的培養液超速離心，從上清液獲得噬菌體。