Question

【題目】幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，自然界有些植物能產生幾丁質酶催化幾丁質水解從而抵抗真菌感染。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入沒有抗性的植物體內，可增強其抗真菌的能力。下圖表示為獲取幾丁質酶基因而建立cDNA文庫的過程。

（1）圖示以mRNA為材料通過_____________法獲得cDNA，該方法依據的原理是_____________，通過這種方法獲得的基因中缺乏_____________和_____________結構，導致將其直接導入受體細胞中不能復制和表達。

（2）與選用老葉相比，選用嫩葉更易提取到mRNA，原因是_______，且提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是_____________。

（3）將從cDNA文庫中獲得的幾丁質酶基因和質粒載體用_____________酶和DNA連接酶處理后連接起來，構建基因表達載體，DNA連接酶催化形成的化學鍵是_____________。

Answer 1

【答案】反（逆）轉錄法 堿基互補配對 復制原點 啟動子 嫩葉組織細胞易破碎 防止RNA降解 限制（酶） 磷酸二酯鍵

【解析】

基因工程的操作步驟：獲取目的基因；構建基因表達載體；把目的基因導入受體細胞；目的基因的檢測和鑒定。

（1）構建cDNA文庫時，以mRNA通過反轉錄法依據堿基互補配對原理合成DNA，通過反轉錄合成的基因中無啟動子、終止子、復制原點等結構，導致將其直接導入受體細胞中不能復制和表達。

（2）嫩葉組織細胞易破碎，更易提取到mRNA，且提取RNA時，需添加RNA酶抑制劑可以防止RNA降解。

（3）構建基因表達載體時，需要用限制酶和DNA連接酶進行處理，限制酶破壞磷酸二酯鍵，DNA連接酶催化磷酸二酯鍵形成。