Question

【題目】科學家將魚抗凍蛋白基因轉入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環境中生長．質粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制性核酸內切酶切割位點，如圖是轉基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①∽④是轉基因抗凍番茄培育過程中的相關步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關結構或細胞．請據圖作答：

（1）在構建重組DNA時，可用一種或多種限制性核酸內切酶進行切割，為了避免目的基因和載體在酶切后產生的末端發生任意連接，在此實驗中應該選用限制性核酸內切酶 ______ 分別對 ______ 、 ______ 進行切割，切割后產生的DNA片段分別為 ______ 、 ______ 種。

（2）培養基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細胞的生長，要利用該培養基篩選已導入魚的抗凍蛋白基因的番茄細胞，應使I重組DNA中含有 ______ 作為標記基因。

（3）研究人員通常采用 ______ 法將魚抗凍蛋白基因導入番茄細胞內。

Answer 1

【答案】 PstI、SmaI 含魚抗凍蛋白基因的DNA 質粒 4 2 抗氨芐青霉素基因 農桿菌轉化

【解析】試題分析：本題考查基因工程的操作程序，考查對基因工程工具的特點、各操作步驟原理的理解。

（1）考慮既不破壞目的基因又能切除目的基因，在此實驗中應該選用限制性核酸內切酶PstI和SmaI分別對含魚抗凍蛋白基因的DNA 和質粒進行切割，在含魚抗凍蛋白基因的DNA上共有三個酶切位點，切割后產生的DNA片段有4種，環形質粒上有2個酶切位點，酶切后有2種DNA片段。

（2）質粒中的抗氨芐青霉素基因作為標記基因，可用于篩選已導入魚的抗凍蛋白基因的番茄細胞。

（3）將魚抗凍蛋白基因導入番茄細胞內通常采用農桿菌轉化法。