Question

【題目】人乳鐵蛋白是一種重要的藥用保健蛋白．如圖表示利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人乳鐵蛋白的過(guò)程，圖中Tetr表示四環(huán)素抗性基因，Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，五種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示，請(qǐng)回答以下問(wèn)題：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
識(shí)別序列 及切割位點(diǎn)

（1）①過(guò)程常采用的方法是 ．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到啟動(dòng)子和之間，這樣人乳鐵蛋白基因就能在乳腺細(xì)胞中表達(dá)．
（3）要將人乳鐵蛋白基因插入質(zhì)粒，若只允許使用一種限制酶，應(yīng)選擇的限制酶是 ．
（4）據(jù)圖分析，篩選含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞首先需要在含（填“四環(huán)素”或“氨芐青霉素”或“四環(huán)素或氨芐青霉素”）的培養(yǎng)基上進(jìn)行，原因是 ．
（5）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來(lái)，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為 ， 對(duì)于該部位，這兩種酶（“都不能”或“只有一種能”）切開(kāi)．

Answer 1

【答案】
（1）顯微注射法
（2）終止子
（3）Sau3AⅠ
（4）氨芐青霉素；用限制酶切割后破壞了Tetr基因，但不會(huì)破壞Ampr基因，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞（對(duì)氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來(lái)
（5）；都不能
【解析】解：（1）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法．（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到啟動(dòng)子和終止子之間，這樣人乳鐵蛋白基因就能在乳腺細(xì)胞中表達(dá)．（3）根據(jù)表中五種酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)可知，限制酶Sau3AI還可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的識(shí)別序列，因此要將人乳蛋白基因插入載體，在只允許用一種限制酶酶切載體和人乳鐵蛋白基因的情況下，應(yīng)選擇限制酶Sau3AI．（4）據(jù)用限制酶Sau3AI切割后會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因，但不會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，因此倒入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞可能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來(lái)．（5）根據(jù)表格中各種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)可知，若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來(lái)，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為 ，對(duì)于該部位，這兩種酶都不能切開(kāi)． 所以答案是：（1）顯微注射法（2）終止子（3）Sau3AⅠ（4）氨芐青霉素 用限制酶切割后破壞了Tetr基因，但不會(huì)破壞Ampr基因，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞（對(duì)氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來(lái)（5） 都不能
【考點(diǎn)精析】掌握基因工程的原理及技術(shù)是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．